《生物样品预处理》PPT课件.ppt

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1、生物样品预处理的常用方法以及最新进展常用的处理方法处理方法简介4生物样品预处理的目的1预处理的指导原则23目录一、生物样品生物样品的种类生物样品血液尿液其他头发唾液组织器官胆汁、乳汁、脑脊液、泪液、精液、胃液、胰液、淋巴液、粪便等。一、生物样品预处理的目的1.使药物从缀合物及结合物中释放出来，以测定药物的总浓度。2.生物样品介质组成复杂，干扰多，而药物组分是微量的，必须先经过预处理，使纯化，富集。3.为了适应和符合测定方法所要求的灵敏度。4.为了防止分析仪器的污染、劣化，提高测定灵敏度、准确度、精密度和选择

2、性等。二、生物样品预处理的指导原则生物样品进行预处理时应考虑到的问题：1.药物的理化性质和存在性质2.待测药物的浓度3.药物测定的目的4.选用的生物样品类型5.样品预处理与分析技术的关系二、指导原则-预处理应考虑问题1.药物的理化性质和存在形式A.酸碱性质、未电离分子的亲脂性、挥发性：涉及药物的提取性质、是否挥发损失以及能否采用GC法a.较亲脂的药物：可用溶剂萃取，也可用烷基键和相硅胶、大孔吸附树脂及亲水型填料SPE等方法。b.亲水性较强且有酸碱性、可电离药物：离子交换柱和离子对液液萃取等。c.亲水性较强但

3、不能电离药物：沉淀蛋白二、指导原则-预处理应考虑问题1.药物的理化性质和存在形式B.药物在体内的存在形式及蛋白结合率：a.结合蛋白率高:首先去蛋白b.多为代谢缀合物：缀合物水解C.药物的光谱特性及官能团特性：涉及分析仪器的选择以及是否需要衍生化和特殊检测器。紫外吸收强弱：是否用UV检测器含有-NO2、-Cl等电负性基团：ECD检测器二、指导原则-预处理应考虑问题1.药物的理化性质和存在形式D.药物的稳定性：a.易氧化药物:加入抗氧剂b.易被光分解药物:避光c.易被酯酶水解药物:对酶进行灭活二、指导原则-预处

4、理应考虑问题2.待测药物的浓度浓度越大，预处理要求越低；反之，浓度越小，预处理要求越高。例如，地高辛的治疗血药浓度为1-2ng/ml,而水杨酸的治疗血药浓度为20-100μg/ml。3.药物测定的目的a.急性中毒病例：快速鉴定所怀疑的药物，尽可能短时间测得。预处理可粗放些。b.分别获得酸性、中性或碱性代谢物：要考虑全面、细致二、指导原则-预处理应考虑问题4.选用的生物样品类型血浆、血清：除蛋白然后提取唾液：离心去粘蛋白尿液：酸水解或酶水解法使缀合物水解头发：有机破坏5.样品预处理与分析技术的关系样品预处理需

5、要的净化程度与所用分析方法是否专属、是否具有分离能力、检测系统对杂质污染的耐受程度有关。三、常用的处理方法常用方法1.有机破坏法2.除蛋白法3.缀合物的水解4.分离，纯化与浓集5.衍生化法重点介绍除蛋白法液液萃取法三、常用的处理方法-有机破坏法1.有机破坏法分类特点样品湿法破坏硝酸—高氯酸法1、硫酸作为分解剂（消化剂），加氧化剂（硝酸、高氯酸、过氧化氢等）作辅助分解剂。2、破坏能力强，反应比较激烈，操作时，应在通风橱内进行。3、先低温反应，再高温蒸发，以免发生爆炸；4、所得的无机金属离子，一般为高价态。血、

6、尿、组织电热消化器法人发电热板消化法烘箱消化法干法破坏高温炽灼法1、适用于卤素、硒、硫、磷等微量元素分析的前处理2、高温炽灼法：坩埚，先完全炭化，再灰化，盐酸溶解定容。盐酸加无水碳酸钠或氧化镁等以助灰化。（高温电子炉、低温等离子）3、氧瓶燃烧法：密闭的燃烧瓶中进行燃烧，选择适当吸收液。氧瓶燃烧法血、人发三、常用的处理方法-除蛋白法蛋白质沉淀酶解法去除蛋白三、常用的处理方法-除蛋白法1.蛋白质沉淀蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation)，变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性

7、而使蛋白质沉淀，在一定的条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。表面水化层调节pH至等电点蛋白质亲水胶体颗粒凝集析出表面电荷加入脱水剂破坏破坏三、常用的处理方法-除蛋白法测定血样时，首先应去除蛋白质。去除蛋白质作用：a.可使结合型药物释放出来，以便测定药物的总浓度；b.可预防提取过程中蛋白质发泡，减少乳化的形成；c.可保护仪器性能（如保护HPLC柱不被污染），延长使用期限。三、常用的处理方法-除蛋白法1.蛋白质沉淀方法溶剂解法盐析和脱水加入中性盐蛋白质沉淀加入强酸生成不溶性盐沉淀加入重金属沉淀剂三、常用的处理方

8、法-除蛋白法A.溶剂解法-加入与水相混溶的有机溶剂加入水溶性的有机溶剂，可使蛋白质分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，使与蛋白质结合的药物释放出来。常用的水溶性有机溶剂有：乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃等。含药物的血浆或血清与水溶性有机溶剂的体积比为1：（1～3）时，就可以将90％以上的蛋白质除去。水溶性有机溶剂的种类不同时，析出的蛋白质形状亦不同；并且所得上清液的pH值也稍有差别，如用乙腈或甲醇