流动注射化学发光同时检测甲胎蛋白和癌胚抗原.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第7期2010年7月ChineseJournalofAnalyticalChemistry924～928DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．00924流动注射化学发光同时检测甲胎蛋白和癌胚抗原林洁华张慧梅振华胡孔诚(青岛科技大学化学与分子工程学院，生态化工教育部重点实验室，青岛266042)摘要将包被有单克隆抗体的两个透明微型检测池串联在流动注射分析装置上，利用移动式微型检测池建立了一种能同时检测甲胎蛋白和癌胚抗原的流动注射化学发光免疫分析方法，为提高分析

2、效率提供了一种有效途径。样品抗原和辣根过氧化物酶标记的相应抗体分别导入微管进行孵育，形成三明治式免疫夹心结构。在注入鲁米诺和HO后，两微型检测池中分别形成较稳定的酶催化化学发光体系。通过切换检测池，使两个透明微型检测池中发生的酶促增强化学发光反应相继得到检测，从而实现两种待测物的同时检测。考察了一系列影响化学发光检测的参数，如免疫反应时间、鲁米诺和H。O的浓度及反应介质的pH值。在最佳实验条件下，甲胎蛋白和癌胚抗原的检测线性范围分别为1．25～50．00g／L和1．25～40．00g／L，检出限分别为1．06和1．O0L。

3、对人血清实际样品进行了检测，取得了满意的结果。关键词流动注射化学发光；甲胎蛋白；癌胚抗原；串联微型检测池1引言癌症是全人类所面临的最危险的疾病之一。对肿瘤标记物的检测在疾病普查、癌症的临床诊断和患者的康复评估方面起着极重要作用。由于抗原一抗体的特异性分子识别具有很高的选择性，免疫分析技术已成为临床肿瘤标记物定量分析中的主要方法。免疫传感器选择性好、灵敏度高、操作简便，与其它换能器相结合在近年来得到迅速发展。目前已出现许多用于单组分肿瘤标记物检测的免疫传感器的报道，。在临床检测中，许多疾病的诊断通常需要综合研究多种肿瘤标记物

4、的数据来断定，仅对单个肿瘤标记物的检测是不足以诊断疾病的。因此，多组分肿瘤标记物的同时检测迅速发展起来并极大促进了癌症的精确诊断J。与传统的单组分免疫分析相比，多组分免疫分析法具有样品分析通量高、样品消耗低、分析时间短等优点。文献[3，8]对多组分免疫分析的发展历程进行了详细综述。有关多种标记物模式[9或不同免疫反应区域的区间分辨模式¨o．⋯的多组分免疫分析方法报道较多。许多电化学免疫传感器¨，”和光学阵列法’用于多组分肿瘤标记物的检测。化学发光(CL)分析技术以其灵敏度高、选择性好、装置简单和检测速度快等优点在多组分分析

5、中引起广泛重视“J。Sun等将芯片技术与化学发光技术联用，实现了人体血清中CA125，CA15—3，CEA，AFP，PSA等12种肿瘤标记物的平行检测，用于1000多例癌症病人的血清检测，综合灵敏度达68．18％。Fu等。。。。将底物区带分辨技术用于多组分肿瘤标记物的连续化学发光检测，以甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)为目标分析物，聚醚噻酚为捕获抗体的固定化膜材料，建立了基于双通道分辨技术的流通式两组分免疫分析体系，联合检测AFP和CEA的检出限分别为1．5和0．25L。本研究建立了测定AFP和CEA两组分肿瘤标记物

6、的化学发光酶联免疫分析法(CL—EIA)。以分别包被了AFP单克隆抗体和CEA单克隆抗体的微孔板(微型检测池)为免疫反应器，基于夹心式免疫反应模式，结合流动注射化学发光分析技术，在自制的串联可移动式免疫流通检测池中同时检测AFP和CEA。本研究采用两种固定了单克隆抗体的微型检测池串联的模式，实现了单通道同时分离检测甲胎蛋白和癌胚抗原。使用串联的模式组装微型免疫检测池，在串联阵列中分别固定和标记。各微型检测池中的固定化单克隆抗体与注入的待测物及酶标抗体发生夹心免疫反应，随后再与发光底物反应，进行信2009—10-24收稿；2

7、010~3-03接受本文系国家自然科学基金(Nos．20775038，20905041)及山东省自然科学基金(Nos．Y2008B02，Y2008B32，Q2007B03)资助E—mail：hukongcheng@126．corn第7期林洁华等：流动注射化学发光同时检测甲胎蛋白和癌胚抗原925号检测。采用外部手柄来灵活切换串联式检测池在光窗处的位置，实现多组分混合样品的同时测定。本方法虽然比并联式检测池消耗样品量多，但是可控性和可操作性强，并且采用一次性使用的杯状微孔板(用过即抛型)作为检测池，成本低，避免了传感器应用中的

8、再生步骤，节约了测定时间。本研究为探索单通道多组分在线化学发光免疫分析技术提供了一定的理论依据。2实验部分2．1仪器与试剂检测装置包括可移动的自制检测池床(图1)和两个固定了单克隆抗体(anti-AFP，anti-CEA)的微型检测池。聚四氟乙烯管(内径0．8mm)和硅胶管(内径1．0mm)作为整个系统