显微镜的七种观察方式.doc

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1、显微镜的七种观察方式一•明视野观察(BrightfieldBF)明视野镜检是犬家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。明视野二.暗视野观察(DarkfieldDF)暗视野实际是暗场照明发。它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此，视场成为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的象。暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的情况卜，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。若把光线斜射它，由于光

2、的反射，微粒似乎增人了体积，为人眼可见。m..m暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光朿由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利川被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。暗视野观察的分辨率远髙于明视野观察，最髙达0.02—0.004暗视野三.相并镜检法（PhasecontrastPH）在光洋显微镜的发展过程屮，相差镜检术的发明成功，是近代显微镜技术屮的重要成就。我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的

3、生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本.相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这人人便利了活体细胞的观察，因此相差镜检法广泛应用于倒宜显微镜。相茅显微镜的基本原理是，把透过标本的对见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路,同时被延迟了1/4九（波长）,如果再增加或减少1/4儿则光程

4、差变为1/2九，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减卞，提高反差。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特姝之处：1.环形光阑（annulardiaphragm）位于光源与聚光器之间，作川是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。2.相位板（annularphaseplatc）在物镜屮加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4入。分为两种：1.A+相板：将直射光推迟1/4入，两组光波合轴后光波相加，振幅加人，标本结构比周囤介质更加变亮，形成亮反差（或称负反差）。2.B+相板

5、：将衍射光推迟1/4九，两组光线合轴厉光波相减，振幅变小，形成暗反差（或称正反差），结构比周围介质更加变暗相差原理微分T■涉镜检术出现于60年代，它不仅能观察无色透明的物体，而且图象呈现出浮雕壮的立体感，并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点，观察效果更为逼真。原理；微分干涉称镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等，光束分别在距离很近的两点上通过被检物体，在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小，而不出现重影现象，使图象呈现出立体的三维感觉。微分干涉图片DIC

6、显微镜的物理原理完全不同于相差显微镜，技术设计要复杂得多。DIC利川的是偏振光,有四个特殊的光学组件：偏振器(polarizer)、DIC棱镜、DIC滑行器和检偏器(analyzer)0偏振器山接装在聚光系统的前而，使光线发生线性偏振。在聚光器屮则女装了偌吗斯斯棱镜,即DTC棱镜，此棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光(x和y),二者成-小夹角。聚光器将两束光调整成与显微镜光轴平行的方向。最初两束光相位一致，在穿过标本相邻的区域厉，由于标本的厚度和折射率不同，引起了两朿光发生了光程差。在物镜的后焦

7、面处安装了第二个偌吗斯斯棱镜，即DIC滑行器，它把两束光波合并成一束。这时两束光的偏振而(x和y)仍然存在。最后光束穿过第二个偏振装苣，即检偏器。在光束形成目镜DK：影像之前，检偏器与偏光器的方向成直角。检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光，从而使二者发生T•涉。x和y波的光程差决定着透光的多少。光程差值为0时，没有光穿过检偏器；光程差值等于波长一半时，穿过的光达到最大值。于是在灰色的背景上，标本结构呈现出亮暗羌。为了使影像的反差达到最佳状态，对通过调节DIC滑行器的纵行微调来改变光程差

8、，光程差可改变影像的亮度。调节DIC滑行-器可使标本的细微结构呈现出正或负的投影形彖，通常是一侧亮，而另一侧暗，这便造成了标本的人为三维立体感，类似大理石上的浮雕AB微分干涉原理图71.偏光显微镜(PolarizingmicroscopePOL)偏光显微镜的特点偏光显微镜是鉴定物质细微结构光学性质的一种显微镜。凡具有双折射的物质，在偏光显微镜下就能分辨的清楚,当然这些物质也可用染色发來进行观察，但有些则不可能，而必须利用偏光显微镜。偏光显微镜的特点，就是