课题1微生物的实验室培养.doc

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1、课题1微生物的实验室培养学习目标了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。学习重点无菌技术的操作学习难点无菌技术的操作自主学习一、培养基1.概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其—的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。2.营养构成：备种培养基一般祁含有、、和,此外还要满足微生物生长对、以及的要求。3.培养乳酸杆菌时需在培养基屮添加、培养霉菌时需将培养基PH调至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。K思考从细胞的化学元素组成来看，培养基屮为什么部含有这些营养成

2、分？【补充1】碳源：如C02、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉育、蛋白豚等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、0、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。总结：按培养基的物理性质、化学性质和川途分类二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论冋答下列问题：（一）获得纯净培养物的关键是,具体操作如下：1.对实验操作的—、操作者的和进行。2.将用于微生物培养的、和等器具进行。3.为避免周围环境屮微生物的污染，实验

3、操作应在—附近进行。4.实验操作时应避免己经灭菌处理的材料用具与相接触。（二）消毒和灭菌1.消毒是指、常用的方法有、>消毒法。2.灭菌是指o常用的方法有：、、灭菌。分别适用于那些用具?K思考2』无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？K思考3』利用干热灭菌箱对玻璃器1111灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？K思考4』物品装入高压蒸汽火菌锅火菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是;随后关闭排气阀继续加热，气压升至,温度为,并维持;最后切断热源，使温度门然降温，气压务必

4、降至—时打开锅盖，其目的是防止实验操作一一大肠杆菌的纯化培养:本实验所用的培养基是,本实验可分成和两个阶段进行。一、制备牛肉膏蛋白腺固体培养基1制备牛肉膏蛋白脉固体培养基的操作步骤是：K思考5习在制备牛肉膏蛋白腺尚体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作屮需要不断川玻璃棒搅拌的H的是什么？K思考63牛肉膏和蛋白月东主要为微生物提供什么等营养物质？2.倒平板：待培养基冷却至°C左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：%1在火焰旁右手拿,左手;%1使锥形瓶的瓶口:%1左手将培养皿,右

5、手,立刻盖上111L盖。%1待平板冷却凝固后，将平板0K思考73锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？K思考8》倒平板的目的是什么？K思考9』若1111盖和皿底Z间粘有培养基，则该平板能占培养微生物？为什么？K思考配制斜面培养基作川是什么？，试管为什么要加塞棉塞?二、纯化大肠杆菌微生物接种：最常用的是法和法。另外还有穿刺接种和斜而接种等。1.平板划线法是的操作，将聚集的菌种逐步鯉分散到培养基的表面。其操作步骤是：①将在酒精灯火焰上灼烧直至3②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。

6、③将菌种试管口通过火焰达到的H的。④将冷却的接种环伸入到o⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。⑥将1111盖打开一条缝隙，把接种环,盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。⑧将平板培养0K思考113取菌种前灼烧接种环的目的筮什么？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环?取菌种和划线前都要求接种环冷却麻进行,其目的是?最后灼烧接种环的目的是?衣第1次划线后都从上次划线末端开始的日的是?2・稀释涂布平板法则是将菌液进行一

7、系列的梯度鲤，然后将进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的拯准菌注。系列稀释操作:%1取盛有mL水的无菌试管6支编号101、102、103、104、105、106o%1用灼烧冷却的移液管吸取—mL菌液注入编号为101试管屮，并吹打3次使Z混匀。%1从101倍液屮吸取mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。K思考22』系列稀释操作的注意事项是什么？K思考23』涂布平板操作的步骤是什么？结果分析与评价1培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？

8、2在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？3培养12h和24h后的菌落大小？；菌落分布位置？原因？K思考143在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？K思考152频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？典卑精析类型一微生物的营养要素【例1】下列关于微生物营养的说法，正确的是（）A.同一种物质不可能既作碳源又作氮源B.凡是碳源都能提供能量c.除水以外的无机物仅提供无机盐D.无机氮源也能提供能量类型二无菌技术【例2］细菌培养过程屮分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的