理化因素对白芸豆凝集素生物学活性影响.pdf

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1、南方农业学报JOURNALOFSOUTHERNAGRICULTURE2013，44(9)：1439—1443ISSN2095一1191：CODENNNXAABhttp：／／www．nfiy)【b．cnDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2013．9．1439理化因素对白芸豆凝集素生物学活性影响刘超，任丽蓉，刘芳，吴三林，伏秦超(乐29*范学院峨眉山生物多棒I生保护与利用研究所。四川乐山614004)摘要：【目的】研究物理与化学因子对白芸豆凝集素生物学活性的影响，为白芸豆凝集

2、素开发利用奠定理论基础和提供技术参考。【方法】白芸豆(PhaseolusvulgarisL．)种子经硫酸铵分级沉淀、DEAE—Sepharose离子交换和SephadexG．100凝胶柱层析得到凝集素(PVL)；然后以不同温度和pH梯度、不同金属离子、不同变性剂处理样品，通过倍比稀释法测定凝集素的生物学活性。【结果】白芸豆凝集素能使兔血红细胞发生凝集，在20～70oC红细胞凝集活性不受影响，当温度达到80oc0寸凝集素样品仅有25％凝血活性，85℃加热30min凝血活性全部消失。用EDTA溶液处

3、理后，白芸豆凝集素失去凝血活性，金属离子M矿和K+能恢复凝血活性，Mn2+能完全恢复凝血活性，Ba2+、Cu斗、Fe”、Ca2+不能使凝血活性恢复。白芸豆凝集素在缓冲液pH低于4．oH寸凝血活性逐步降低，在pH3．0时，活性仅有45％；在缓冲液pH高于7．2时活性逐步降低，pH9．0时凝血活性仅有44％。3种变性剂变性试验中，脲能使凝集素凝血活性降低70％，盐酸胍能降低30％，SDS能降低18％。【结论】白芸豆凝集素具很强的热稳定性和广谱酸碱度适应能力；凝血活性依赖Mn2+等金属离子，且仅能被变

4、性剂6mol／L脲部分抑制。在实际应用中，可根据适宜条件控制其物理和化学因素，防止凝集素变性失活。关键词：白芸豆；凝集素；理化因素；凝血活性中图分类号：$643．9文献标志码：A文章编号：2095—1191(2013)09—1439—05Effectsofphysico-chemicalfactorsonbiologicalactivityoflectinfromPhaseolusvulgarisL．seedsLIUChao，RENLi-rong，LIUFang，WUSan-lin，FUQin—

5、chao(InstitutionofBiodiversityConservationandUtilizationinMountEmei，LeshanNormalUniversity，Leshan，Sichuan614004，China)Abstract：【Objective】Thepresentinvestigationwasdonetodeterminetheeffectsofphyico—chemicalfactorsonbio—logicalactivitiesofthelectinfro

6、mPhaseolusvulgarisL．seedstoprovidetheoreticalreferencesforapplicationanddevelop-mentof％aseolusvulgansL．1ectin．【Method】ThePhaseolusvulgarisL．1ectin(PVL)wasobtainedbyammoniumsulphateprecipitation，ionexchangechromatographyondiethylaminoethyl—Sepharosean

7、dcarboxymethyl—Sepharose．Thegelfiltra—tionchromatographyonSephadexG—l00frombulboftheediblePhaseolusvulgarisL．wastreatedwithEDTAandmetalions，varioustemperatures，pHanddenaturantstoinvestigatetheeffectsonhemagglutinatingactivity．【Result】ThelectinfromPha

8、seolusvulgarisL．couldagglutinaterabbitredbloodcell．TheresultsshowedthatthehemagglutinatingactivityofPVLwasstablefrom20℃to70oC．ThehemagglutinatingactivitvofPVLdeclined(only25％)markedlyat80℃，andwastotallyinactivatedat85℃after30min．Theprocoagulantactivi