融合杀虫基因对甘蔗的遗传转化.pdf

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1、南方农业学报．JOURNAL0FSOUTHERNAGRICUITuRE2012，43(8)：1086—1089ISSN2095—119l：CODENNNXAABhttp：，，www．111．nyxb．comDOI：10．3969／j：is叽．2095—1191．2012．08．1086融合杀虫基因对甘蔗的遗传转化邓智年，魏源文，黄诚梅，潘有强，吕维莉，李杨瑞‘(广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室，南宁530007)摘要：【目的】利用MAR序列介导转基因表达及融合杀虫基因，以期克服外源基因失活，增强抗虫基因表达

2、能力，延缓昆虫抗性的发生，获得高抗虫转基因甘蔗植株。【方法】以甘蔗品种R0c25为材料，进行愈伤组织、芽苗分化和生根的Hyg抗性筛选试验。利用农杆菌介导，将含MAR序列介导融合杀虫基因(AVAc—cpTI)导入甘蔗基因组。【结果】愈伤组织增殖、出芽时Hyg的最佳筛选浓度为50mg／L，生根时Hyg的最佳筛选浓度为30mg几。获得13个MAR序列介导转基因表达基因系，48株Southem杂交阳性甘蔗植株；获得8个无MAR序列介导转基因表达基因系，7株Sou出em杂交阳性甘蔗植株。MAR序列介导转基因表达使转化过程中

3、转基因系的获得数量提高了62．5％。【结论】建立了R0c25的潮霉素抗性筛选体系；MAR序列介导融合杀虫基因进行甘蔗遗传转化，可提高甘蔗外源基因转化效率。关键词：甘蔗；融合杀虫基因；野苋菜凝集素基因；豇豆胰蛋白酶抑制剂基因；MAR序列中图分类号：S566文献标志码：A文章编号：2095—1191(2012)08—1086—04们●』●●1●n』●J—J■ptI。USlonlnSeCtiCldalgenetor2enetlCtranSlormanon0tSUgarCaneDENGZhi—nian，WEIYuan—w

4、en，HUANGCheng—mei，PANYou—qiang，LnWei—li，LIYang—rur(GuangxiCropGeneticImpmvementandBiotechnologyIJab，Nanning530007，China)Abstract：【0bjective】Theaimofthisexperimentistoproducetransgenicsugarcaneplantswithhighinsect—resis—tancebvusingMARsequencemediatedtmnsgenic

5、expressionandfusioninsecticidalgenetoovercometheexogenousgeneinactivation，stren昏hengeneexpressionanddelayinsectresistance．【Method】usingtheembryogeniccallisugarcaneVari—etvROC25astheacceptors，itssensitivitvofhy灯omvcintocalluspmliferation，buddifEbrentiationandm

6、otingweretest—ed．Fusioninsecticidalgene(AVAc—C1)TI)nankedonbothsidesoftheMARswereintmducedintosugarcanebyA．￡ume南cjensinfection．【Result】Theoptimumscreeningconcentrationofhygmmycinforcallusproliferationandbuddingwas50mg，L；asformoting，theconcentrationwas30mg，L．T

7、hirteentmnsgeniclineswereattainedwhenthevectorligatedwithMARsinthesamedirectiononbothsidesofthefhsedgene，andresultedin48transgenicpositivesugarcaneplantsbymethodsofsouthemblotting；whichwas62．5‘殇higherthanthatofthecontml_0ntheotllerhand，8岫nsgeniclineswithoutMA

8、Rs，pmducedonly7confinIledtransgenicsugarcaneplantsinthecontmlgroup．【ConclusionlThescreeningsystemofhygmmycinresistancef曲sugarcanecultivarROC25wasestablished．Fusioninsecticidalgene(AVAc—Cp