提高叶绿体色素抽提效率的方法探讨.doc

《提高叶绿体色素抽提效率的方法探讨.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、提高叶绿体色素抽提效率的方法探讨周衍茂菠菜是“叶绿体色索提取和分离”实验中的常用材料。但受波菜生长的季节性限制，有的季节采集不到，用其它植物绿叶（树叶、蔬菜叶、野生植物叶），尤其是四季均可采到的常绿植物叶片替代，按教材的提取方法操作，所得到的色索提取液呈黄绿色，色索含量低,展层后，色索带颜色浅，有的色索带不能显现，实验效果差。分析其原因主要是：1）对于角质层厚、机械组织多的绿叶，按常规方法研磨，组织、细胞破碎率低，提取出的色索绝对量少；2）对含水量较高的蔬菜叶筹，因过多水分的存在，降低了丙酮对色索分子的抽提效率。因此实验屮如何增加叶片的软化

2、度，有效破坏组织、细胞结构，降低叶片含水量就成为提高叶绿体色索抽提效率的关键。我们通过试验，采取沸水瞬吋浸泡叶片，并在研磨时附以脱水剂的方法，可有效地提高色索提取效率，增加提取液屮色索浓度。1操作方法选取植物嫩绿叶数片（2g左右），盛半烧杯清水，直电炉加热至沸，将叶片放入沸水屮煮30〜40s；若无电炉加热，老师课前用保温瓶备足刚开的水，将绿叶宜空烧杯中，加开水烫40〜50s亦可。捞出烫毕叶片，立即放入冷水屮冷却数秒钟，取出平铺在多层吸水纸（可用滤纸装订成小本子，专供吸水之用，潮湿后可烘干继续使用）之间，用手掌施力压紧以进一-步除去叶片屮水分

3、。剪碎叶片，放入研钵中，再向研钵屮务加入少量（约半骨勺）海砂（二氧化硅）、CaCOs.无水N^SOi用力研磨，直至叶片完全磨碎成泥状，加5〜7ml丙酮，继续施力研磨、抽提，待研钵内容物由“稀糊状”变成“稠糊状”吋，将糊状物倒入基部塞有一小块脱脂棉的漏斗屮过滤，收集滤液，备用。2儿点讨论2.1获得高浓度色索提取液的关键2.1.1沸水处理叶片是获得高浓度色索提取液的有效措施叶片经沸水瞬吋处理后，机械强度下降，质地软化，呈明显失水状态；叶片组织、细胞结构遭破坏，细胞的通透性增加，提高了丙酮对色索的提取率；同时高温可使与色索结合的色蛋白变性，以利于

4、色素的释放。对于角质层厚或含水量高的叶类，经沸水浸泡后，其效果尤为显箸，所获得的色素抽提液呈墨绿色。而不经沸水处理，直接加丙酮研磨抽提，得到的色索提取液呈黄绿色，展层后，色带显色浅，辨认困难。用此方法处理菠菜，所得到的提取液的颜色，也较常规提取法明显加深，展层后，4条色索帯清晰可辨。需要注意的是：叶片在沸水屮浸泡的时间不宜过长，以免叶绿索遭破坏。--般的叶片在沸水屮浸煮40〜50s即可，角质层厚的革质叶浸煮时间可稍作延长。2.1.2研磨吋加入适量的脱水剂可提高色索的提取率丙酮除可溶解细胞内的色素等脂类物质外，也可与水分子互溶，若叶片的含水量

5、高，势必减少丙酮同色索分子的结合，致使丙酮对色索的抽提效率下降。因此，对含水量高的蔬菜等类叶片，除在沸水处理过程屮失去部分水分外，组织、细胞内仍存有不少水分，为减少这部分水对丙酮提取色索的彩响，在加CaC0：｛和海砂的同时，加入脱水剂无水N/SOi研磨，以吸附多余的水分，后再加丙酮研磨、抽提。试验证明：加适量的脱水剂対提高提取液屮色索的含量也是有效的。2.2关于抽提溶剂的用量教材中取5g叶片，用5ml丙酮抽提，对于质地较软、色索含量高的菠菜叶而言，这个量是合适的，但对于角质层厚的叶类，用5ml丙酮抽提5g材料屮的色索，其丙酮的添加最偏少，操

6、作屮往往叶片尚未研碎，丙酮就挥发干了，导致提取液屮色索含量低，实验效果差，实践屮这类现象述是较普遍的。减少叶片用量，适当增加丙酮用量，可使研磨彻底,抽提充分，增加了色素在丙酮中的绝对含量。据我们的试验，对于-•般绿叶用2〜3g叶，加6〜7ml丙酮较为适宜。以这种比例，一方而可使叶片得到充分磨碎，另一方而研磨片的“糊状物”也浓缩到适当的稠度。2.3关于研磨后“糊状物”的稀稠度研磨片“糊状物”的稠度，直接影响到提取液的浓度。过稀得到的提取液量人，但色素相对量低；过稠得到的提取液太少，其至过滤后无滤液滴下。我们的经验是：研钵内容物研磨成糊状，且静

7、置片其“糊状物”表而有少量提取液渗出即可。另外，为减少因脱脂棉的吸附而造成提取液的损失，填塞漏斗的过滤用脱脂棉尽可能少。以上方法有效地解决了该实验取材的局限，操作简单、实用。我们用此方法对20余种植物叶片的叶绿素进行提取和分离，均获得了色素带齐、图谱清晰的结果。自《生物学通报》2000年第7期