油菜菌核病接种和观察.doc

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1、四川农业大学实验（习）报告班级：姓名：日期：实验四油菜菌核病的田间调查及接种鉴定一、实验目的油菜菌核病［由Sclerotiniasclerotiorun（Lib.）Debary引起］是油菜的主要病害，能分泌一种毒素，其主要成分是草酸，在致病过程中发挥着重要作用。一般情况下可导致油菜减产10%-20%；严重情况下可减产80%,甚至绝收。目前，油菜中还没有发现抗性品种，所以品种经过接种菌核病病菌后，均表现为发病。不同品种的生育期不同，发育进程中遇到的发病条件不同，发病程度也就不同。因此，该病原菌培育抗病品种是防治油菜菌核病既经济、有效，又安全的措施。于是在油菜杂交育种中对菌核病

2、抗性鉴定和抗原的筛选尤为重要，而鉴定方法的选用乂是其关键环节。因此，本实验通过调查油菜田间菌核病发病情况，旨在掌握田间菌核病发病症状，同时了解菌核病抗性鉴定的儿种方法，通过比较了解各种方法特点。二、实验内容1.油菜菌核病的田间调查实验选取2个品种（早熟和晚熟），在油菜成熟期，分别调查菌核病田间的自然发病情况，每个品种6（）株，最后进行相关统计分析。2.油菜菌核病的接种鉴定实验在油菜角果成熟期间，采用牙签接种和菌丝琼脂块接种两种方法。分别对0727AB/2H293R和9799-8ABL/5862R两个油菜品种进行接种，观察接种后的症状并记录病害发生过程，最后分别调查接种后10

3、个植株的发病情况。三、材料与工具1.材料：多个油菜品种的田间群体，用于试验的抗感材料，病原菌为采自试验田甘蓝型油菜残茬上的菌核，接种于土豆培养基（PDA）萌发菌丝后继代两次，4°C保存用于接种。1.工具：纸牌，小刀，铅笔、牙签、薄膜等。四、方法步骤（一）油菜菌核病的田间鉴定实验1.病害识别油菜在整个生育期均可发病，结实期发病最重。茎、叶、花、角果均可受害，茎部受害最严重。叶片染病初时，呈不规则水渍状，后形成近圆形至不规则形病斑，病斑中央黄褐色，外围暗青色，周缘浅黄色，病斑上有时轮纹明显，湿度大时长出白色棉毛状菌丝，病叶易穿孔。茎部染病，初现浅褐色水渍状病斑，后发展为具轮纹状

4、的长条斑，边缘褐色，湿度大时表面生棉絮状口色菌丝，偶见黑色菌核，病茎内髓部烂成空腔，内生很多黑色鼠粪状菌核。病茎表皮开裂后，露出麻丝状纤维，茎易折断，致病部以上茎枝萎驚枯死。角果染病时，初现水渍状褐色病斑，后变灰白色，种子瘪瘦，无光泽。2.病害级别和病害指数各个品种在田间条件下，均可能有一定的发病。病害程度依照周必文等1994年提出的分级标准调查。0级：全株茎、枝、果轴无症状；1级：全株1/3以下分枝数（含果轴，下同）发病或主茎有小型病斑，全株受害角果数（含病害引起的非生理性早熟和不结实，下同）在1/4以下；2级：全株1/3〜2/3分枝数发病，或分枝发病数在1/3以下而主茎

5、中上部有大型病斑，全株受害角果数达1/4〜1/2；3级：全株2/3以上分枝数发病，或分枝发病数在2/3以下而主茎中下部有大型病斑，全株受害角果数达1/2~3/4；4级：全株绝大部分分枝数发病，或主茎有多个病斑，或主茎中下部有大型绕茎病斑，全株受害角果数达3/4以上。工,（每级别「的植株数X病害级别z）病情指数DI=X100%鉴定植株总数X发病最高级别（4）3.病害程度调査选取2个品种（早熟和晚熟），在油菜成熟期，分别调查菌核病田间的自然发病情况，并统计在菌核病HI间调查表中。（二）油菜菌核病的接种鉴定实验在油菜角果成熟期间，采用牙签接种和菌丝琼脂块接种两种方法。首先观察并记

6、载接种效果和病害发生进程，给出接种后的症状描述和病害发生过程的照片,评述接种效果；然后调查各处理接种株的病害级别；最后统计在菌核病田间调查表(接种)中。其接种具体操作方法如下：1・牙签接种法将牙签均匀摆放于9cm培养皿中，呈辐射状，然后倒入PDA培养基，接种活化菌丝培养至菌丝长至牙签前部，并用I矢用傲子在第二片或第三片无柄叶茎秆处打孔后插入带菌牙签。接种后3d开始，每2d调查1次主茎病斑长度，共调查3〜4次。2.菌丝琼脂块接种法取菌落边沿8cm菌丝块接种于第二或三片无柄叶叶腋处，并将菌丝面贴茎秆，菌丝块和茎秆外围以保鲜膜包裹，保持湿度。接种后3d开始，每2〜3d调查1次主茎

7、病斑长度，成熟前调查病级。最终，通过以上各试验操作方法所得数据，比较两个品种、两种接种方式和未接种处理(大出自然发病情况)的病情指数，写出实验报告。五、实验结果1.本试验所选取的2个甘蓝型油菜两系杂交种(0727AB/2H293R和9799・8AB©/5862R),菌核病在油菜成熟期山间的自然发病情况如表1所示。表1菌核病田间调查表(自然发病)品种或群体名称各个病害级别的植株数总数病情指数(%)012340727AB/2H293R291611406020.839799-8ABr/5862R523181046043.