慢性乙型肝炎患者树突状细胞培养与功能检测方法.doc

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1、慢性乙型肝炎患者树突状细胞培养与功能检测方法【摘要】H的：建立从人外周血分离培养树突状细胞(dendriticcell,DC)及检测其表型与诱导淋巴细胞增殖能力的方法。方法:从未接受抗病毒治疗的CHB患者外周血屮分离单个核细胞，在含GM-CSF.IL-4、TNF-a的完全培养基屮诱导培养为DC,流式细胞仪检测细胞表型，混合淋巴细胞反应检测DC刺激淋巴细胞增殖的能力。结果:CHB患者外周血单核细胞，在体外可诱导出具有典型形态及生物学活性的DC。患者DC的HLA・DR、CD80、CD86的表达率分别为(44.77±8.127)%、(36.65±6.867)%、(32.16±6.340)%,CHB

2、患者DC刺激淋巴细胞增殖的SI为1.39±0.375。与正常人DC相比明显降低(P<0.01)o结论:CHB患者单个核细胞能被诱导培养为DC；通过检测DC表型和刺激淋巴细胞增殖能力可以了解CHB患者抗HBV免疫功能。【关键词】树突状细胞慢性乙型肝炎免疫状态AbstractObjective：ToestablishthemethodofculturingDCfromhumanperipheralbloodandtestingthephenotypeandthecapacityofstimulatingleukocyte・Methods：SelectingCHBwithoutreceivi

3、ngantiviraltreatment,PBMCswereseparatedfromperipheralblood,日ndthenculturedinvitrowithmediumcontainingGM-CSFIL-4INF-uintoDC.ThephenotypeofDCwasidentifiedbyflowcytometry.TheabilitiestostimulateTcellproliferateweredetectedbymixedleukocytesreaction(MLR).Results:PBMCfromCHBpatientswhichwereculturedinvit

4、rocouldbeinducedintotypicalDC.TheexpressionofcostimulatingmoleculesCD80>CD86、HLA-DRinthesurfaceofDCsfromCHBpatientsbeforeantiviraltreatmentwere(32.16±6.340)%、(36.65±6.867)%、(44.77±8.127)%.Thestimulationindex(3)thatDCstimulatelymphocytestoproliferatewas1.39±0.375.Conclusion:IhePBMCfromCHBpatientscou

5、ldbeinducedintoDC.TestingthephenotypeandthecapacityofstimulatingleukocyteofDCfromCHBcanbeknowntheabilityofantiviralimmunity.KeywordsDendriticcell；ChronichepatitisB；Immuniticsituation机体特异性免疫反应的产生，是由抗原提呈细胞(APC)捕获抗原，在其对抗原处理后将抗原信息提呈T、B淋巴细胞后引发的。树突状细胞(dendriticcell,DC)是功能最强大的专职的抗原提呈细胞，在机体的免疫反应屮起着重要作用［1,2

6、］。HBV持续感染与多方面因索有关，其屮患者DC功能低下，抗原提呈能力下降，不能正常诱导机体抗HBV免疫反应是最重要因素之一。HBV持续感染患者仅产生弱的HBV特异的细胞毒性淋巴细胞反应(CILs),导致HBV病毒不能清除和慢性乙型肝炎的迁延不愈。检测和通过治疗改善患者的DC功能在乙肝免疫治疗屮有重要意义。本实验拟建立从人外周血分离培养DC及检测其表型与诱导淋巴细胞增殖能力的方法，并对HBV感染的慢性肝炎患者体内DC功能进行了检测。1材料与方法1.1病例选择选择慢性乙型病毒肝炎10例，男7例，女3例，年龄18岁〜50岁，血清内氨酸转氨酶(ALT)在69U/L-515U/L,平均值为182U/

7、L,6个月内均未使用过抗病毒药物,所有病例参照2005年慢性乙型肝炎防治指南的诊断标准［3］。7名健康志愿者作为正常对照。1.2主要试剂RPM11640培养基为GIBCO公司产品。rhGM-CSF.rhlL-4.rhlNF-a购自晶美公司，为Peprotech公司产詁。MTT、丝裂霉素C、HEPESL■谷氨酰胺为9gma公司产品。PE荧光标记鼠抗人HLA-DR.CD80、CD86单抗为美国BD公司产品。淋巴细