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1、于本试验。首先，将种子放入5()f恒温箱高温处理48h,以打破种子休眠，使种子成熟度保持一致。每份材料挑选50粒饱满的种子，放置于垫滤纸的口径为9cm的培养皿。先用3%的次氯酸钠溶液消毒20min，然后用自來水冲洗3次。在每个培养皿里加10ml水,放入3()1'恒温箱催芽2~3d，待芽长5mm左右时，即移入低温培养箱。低温设()1：、2(：、4X：3个水平，低温处理天数设2d、4d、6d、8d、10d5个水平，共15个(3X5)处理。处理完毕，立即移出低温培养箱,放到有光照且温度为20X：〜30(：的室内条件，使幼芽恢复生长。l()d后，调查幼芽转绿苗情况，计算死苗率。试验重
2、复3次，以其平均值作为统计单元。以死苗率的大小來评价芽期耐冷性的强弱。死苗率(％)=(死苗数/出芽总粒数)x10()o水稻芽期耐冷性的鉴定的方法，具体过程如下：将各置换系及亲本种子置于45°C烘箱中干燥48h,每个置换自交系及亲本挑选150粒饱满的种子，放置于垫滤纸的口径9cm的培养皿里，加入适量的水，使种子1/2体积淹在水里。盖好盖，置于30°C的恒温光照培养箱内催芽，待芽长5〜lOrrnn时选择100个健壮一致的幼芽分置于两个培养皿中，将恒温光照培养箱温度调至5°C处理10d。处理结束后将光照培养箱温度调节至30°C,使水稻幼芽恢复生长10d,调查成活苗数，并计算成苗率(
3、成活苗数/出芽总粒数)。重复3次，以其平均值作为统计单元。于本试验。首先，将种子放入5()f恒温箱高温处理48h,以打破种子休眠，使种子成熟度保持一致。每份材料挑选50粒饱满的种子，放置于垫滤纸的口径为9cm的培养皿。先用3%的次氯酸钠溶液消毒20min，然后用自來水冲洗3次。在每个培养皿里加10ml水,放入3()1'恒温箱催芽2~3d，待芽长5mm左右时，即移入低温培养箱。低温设()1：、2(：、4X：3个水平，低温处理天数设2d、4d、6d、8d、10d5个水平，共15个(3X5)处理。处理完毕，立即移出低温培养箱,放到有光照且温度为20X：〜30(：的室内条件，使幼芽恢
4、复生长。l()d后，调查幼芽转绿苗情况，计算死苗率。试验重复3次，以其平均值作为统计单元。以死苗率的大小來评价芽期耐冷性的强弱。死苗率(％)=(死苗数/出芽总粒数)x10()o水稻芽期耐冷性的鉴定的方法，具体过程如下：将各置换系及亲本种子置于45°C烘箱中干燥48h,每个置换自交系及亲本挑选150粒饱满的种子，放置于垫滤纸的口径9cm的培养皿里，加入适量的水，使种子1/2体积淹在水里。盖好盖，置于30°C的恒温光照培养箱内催芽，待芽长5〜lOrrnn时选择100个健壮一致的幼芽分置于两个培养皿中，将恒温光照培养箱温度调至5°C处理10d。处理结束后将光照培养箱温度调节至30°
5、C,使水稻幼芽恢复生长10d,调查成活苗数，并计算成苗率(成活苗数/出芽总粒数)。重复3次，以其平均值作为统计单元。水稻芽期耐冷性的鉴定参照李太贵的方法，略加修改后进行。具体过程如下：将各重组自交系及亲本种子置于45°C烘箱中干燥48h,使其种子后熟并打破休眠。每个自交系及亲本挑选100粒左右饱满的种子浸种催芽，待芽长约5咖时选择50个健壮一致的幼芽分置于两个培养皿中，每皿25粒。将培养皿置于S°C的培养箱中处理10d。处理完毕后，将光照培养箱温度调节至30°C使幼芽恢复生长10d,然后调查各培养皿中的成苗率，重复2次，以其平均值作为各重组自交系及亲本的成苗率。将成苗率作为芽
6、期耐冷性指标，其计算公式如下:芽期耐冷性（％）=（成活苗数/出芽总粒数）xl00o采用纸卷法作发芽试验，测定水稻RIL群体及其亲本的芽期耐冷性。纸卷法发芽试验的具体操作详见Zhang等口2〕的描述。通过手工选出上年度收获的饱满种子50粒/RIL,50C处理3d除休眠，再经■■•■■.•■■.■•••••■•.表面消毒后30C浸种36h,釆用纸卷法口2］于28C培养箱中培养2〜3d。选留己发芽且芽长8〜12mm的带种芽苗（实际选留的芽苗数为28〜41株/RIL）,继续釆用纸卷法将其转移到10C恒温培养箱中进行冷处理。本实验设置冷处理时间分别为10d和13c!2个处理。冷处理完成
7、后，将培养箱的温度调高至28C,让幼芽恢复生长。分别在恢复培养7d和12d各统计1次芽苗存活率（成活芽苗数/冷处理芽苗数，％）,以此作为芽期耐冷性的鉴定指标。每个冷处理各设2次重复实验，取2次重复的平均值用于QTL分析。试验采取随机完全区组设计，两次重复。具体方法为：取收获后大约3个月的种子50粒，50°C烘3d,然后“84”消毒液浸泡lmin,再用蒸馅水冲洗干净，25”C浸泡24h；浸泡后的种子均匀放在潮湿的滤纸的玻璃培养皿，25°C,黑暗条件下培养箱中发芽7d；选取芽长5~10toni的种子30粒5
