NF-κB、ELAM-1在小梁网细胞氧化损伤中的表达及干预研究.pdf

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1、NF．KB、ELAM．1在小粱网细胞氧化损伤中的表达及干预研究摘要目的：本实验利用Q．硫辛酸(0【．LA)干预氧化应激下的大鼠小梁网细胞，观察小梁网细胞的形态变化，检测核转录因子．r,B(NF．1出)、内皮细胞白细胞黏附分子．1(EL舢Ⅵ．1)的表达，探讨氧化应激、NF．r,B、ELAM．1在原发性开角型青光眼(POAG)发病机制中的作用，以及a．LA对小梁网细胞的保护机制。方法：原代培养大鼠小梁网细胞，免疫组化法鉴定。取传至第三代的细胞按2x105／ml消化传入6孔板，血清饥饿过夜。随机分为五组：A组为正常对照

2、组，加入不含药物的无血清培养基；B组为单纯H202损伤组，加入等量含800ⅢvlH202的无血清培养基；C组为a．LA干预组，按照给予Q．LA浓度的不同分为Cl、C2、C3三个亚组，加入等量含800¨MH20z以及浓度依次为1009M、5000M、10001．tM的a．LA的无血清培养基。将各组细胞均置于5％C02培养箱中37。C培养2h。光学显微镜下观察细胞形态变化，免疫组化法和Real．timePCR法检测并比较各组NF．r,B、ELAM-1表达的变化。结果：1．利用消化法成功培养出大鼠小梁网细胞，原代细胞呈

3、三角形、梭形或不规则形，10-14天融合成旋涡状单层细胞，传至第三代后细胞形态稳定，梭形，胞浆丰富，颗粒多，可见较多突起及分支。取传至第三代的细胞行Anti．LN、Anti．FN、Anti-NSE免疫组化染色鉴定，见细胞质呈棕黄色阳性颗粒，阴性对照不着色，符合小梁网细胞的特性。2．与A组相比，B组小梁网细胞突起减少，细胞回缩，间隙扩大，细胞数量减少；而C组随着{3t．LA浓度的增加，细胞形态改变与A组相比逐渐趋于不明显。3．五组小梁网细胞NF．佃表达有显著统计学差异(F=426．515，P=-0．000)。A组小

4、梁网细胞质中少量表达NF．1出；B组NF．1cB大量活化进入细胞核，表达量较A组明显升高(矿0．000)：C组中NF．1出在胞质、胞核中均有表达，且与B组相比，NF．心mRNA表达量降低(p分别为0．036、0．000、0．000)；C2、C3两组与Cl组相比明显降低(网．000)；C2、C3两组间比较无明显差异(矿O．204)；C2组与A组相比仍偏高(p=0．016)，但C3组与A组相比无明显统计学差异(卿．155)。4．五组小梁网细胞ELAM．1均表达在细胞质，且表达量有显著统计学差异(F=96．409，P=

5、0．000)。A组少量表达ELAM．1mRNA；B组较A组表达明显升高(矿0．000)；C组较B组表达均明显降低p分别为0．016、0．000、0．000)；随着0【．LA浓度的增加，C1、C2、C3三组ELAM．1mRNA的表达量逐渐下降，两两比较均有显著统计学差异(p均为0．000)；C3组与正常组相比仍然偏高(础．004)；结论：I．氧化应激产生的氧自由基可通过活化NF．1出，进一步激活ELAM-1的转录，导致小梁网细胞形态改变、细胞丢失；2．ELAM一1可能通过包括NF．r,B在内的多种途径激活，影响小梁

6、网细胞的形态和功能；3．a-LA可通过抑制NF．心的活化，进一步减少ELAM．1的表达，减轻氧化应激对小梁网细胞的损害；4．a-LA对NF．r,B以及ELAM．1表达的抑制与位．LA呈浓度依赖性，10001．tM的伍‘LA可阻断由800“M1-1202诱导的小梁网细胞中NF-1出的激活，但不能完全阻断ELAM_1表达的上调。硕士研究生喻文倩(tll曼科学)指导老师梁涛副教授【关键词】小梁网细胞；氧化应激；NF-v,B；ELAM一1；值一硫辛酸ExpressionsandinterventionofNF--KBan

7、dELAM—-IinoxidativestressinducedbyH202intrabecularmeshworkcellsAbstractobjective：Toevaluatetheeffectsofnucleartranscriptionfactors—kappaB(NF-心)andendothelialleukocyteadhesionmolecule-I(ELAM-1)inoxidativestressinducedbyhydrogenperoxideCa202)inrattrabecularmesh

8、work(TM)cells．Atthesametime，weusedalphalipoicacid(alphaLA)astheinterventiontherapytoinvestigatetheprotectionmechanismfortheinjuredTMcells．Method：1．PrimarycultureandidentificationofTMcells