植物染色体Giemsa分带.doc

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1、植物染色体Giemsa分带谌诚董琳马楠（武汉生物工程学院10级园林系本科一班）摘要:植物染色体Giemsa分带技术是本世纪70年代以来兴起的一项细胞技术，它已广泛用于植物细咆学、细胞遗传学、植物分类学、物种起源、染色体工程、植物育种等方面研究。关键词：染色体；GiemsaTheplantchromosomeGiemsapointswithAbstract:plantchromosomeGiemsabandingtechniquessincethe1970s,theriseofacelltechnologies,ithasbeenwidelyusedinthestudy

2、ofplantsmallroarscience,cytogenetics,planttaxonomy,theOriginofSpecies,chromosomeengineering,plantbreeding.Keywords:chromosome;Giemsa一、实验目的（1）通过实验，了解植物染色体Giemsa分带技术和方法。（2）学习BSG法显示C带。二、实验原理染色体经过比较温和的Ba(OH)2，变性处理后DNA众连解开。再在盐液（SSC）中温度变性。复性事，并染色质较常染色质快可以优先存在Giemsa结合。染色较深，而常染色质则着色较浅，从而在整个染色体上

3、形成深浅不一的带状。三、实验材料黄瓜或黄豆。四、实验器具和药品1．普通的光学显微镜、染色体标本、恒温水浴锅、酒精灯、器具培养箱、恒温水浴锅，分析天平、小台称(200g)、量筒(50ml、100ml、1000ml、l0ml)、烧杯(200ml)、容量瓶(1000m1)、棕色试剂瓶(200ml)、滴瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、剪刀、镊子、刀片、滤纸、玻璃板、牙签、切片盒。2．药品Giemsa母液、磷酸缓冲液、氯化钠、柠檬酸钠、甲醇、乙醇、冰醋酸、氢氧化钡、秋水仙素(或对二氯苯)、α—溴萘、纤维素酶、胰蛋白酶、醋酸洋红、45％醋酸等。五、实验步骤G带显示的是染色体自身固有结

4、构，能否显示出来．与染色体的处理技术密切相关，因此，G带技术要求比C带严格。目前G带已在许多植物上成功显示，但其中稳定性、重复性高的是玉米G带技术。G带技术沉程较多，其中最为先进的是武汉大学生物系宋运淳等的ASG技术（醋酸—2XSSC，Giemsa)，染色体标本的制作是用去壁低渗火焰干燥法进行的。其流程如下：(1)预处理：切取黄瓜根尖分生组织0.2mm用新配制的饱和α—溴萘28℃下预处理3小时。(2)低渗：用0.075mol／LKCl室温下处理30分钟。(3)固定：用新配制的甲醇－冰酷酸(3：1)固定液在室温下固定30分钟。(4)水洗：固定后的根尖用蒸馏水洗30分钟。

5、(5)酶解：用2％纤维素酶和2％果胶酶混合溶液（1:1）室温下处理3.5小时。(6)固定：倒去酶液，再加入固定液置冰箱(0-4℃)中过夜．(7)制片：取再固定后的根尖置于洁净的载片上，加上固定液用摄子捣碎涂布．并轻轻吹气，促使细胞迅速分散，然后在酒精的火苗上晃动2—3次烤片。以利染色体分散、最后将制好的片在90℃的烘箱中烘烤50分钟。(8)G带处理：将干燥的片子放入60℃2XSSC(pH7.35)盐液中处理40分钟，水洗后随即用0.066mol／L的磷酸缓冲液稀到40-50:1的Gimesa染色40分钟。染完色的片子用蒸馏水淋洗掉染液，于室温下干燥。3．带型分析植物染

6、色体带型目前还未有统一的国际化际准，实验者可根据目的需要对记录分析的站果进行比较分析不同材料间带型区别，在染色体水平上分析染色体类型和生物的遗传结构，从而比较不同材料之间在遗传上的异同。一般通过以下步骤进行：(1)核型分析：选择染色体数目完整，长度度合适，分带清晰的材料制片进行显微摄影：冲洗放大、核型分析。(2)描述带型：对各条染色体的带纹位置、宽窄、深浅、形状进行描述。(3)绘制模式图，在各条染色体模式图上标出各条带纹的位置、宽窄、深浅、形状等线条。思考题：1..染色体制片实验中，秋水仙素预处理，作用何在？答：通过秋水仙素预处理来降低细胞质的粘度，促进染色体缩短分散

7、，阻碍纺锤体形成。2.染色体显带有哪些方法？答：显示C带方法主要有BSG法和HSG法。