食品微生物学检验大肠菌群MPN计数法.docx

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1、记录人：实验日期：名称食品微生物学检验大肠菌群MPN计数法依据GB4789.3—2010食品安全国家标准适用范围食品中大肠菌群的计数原理最可能数（mostprobablenumber，MPN）：基于泊松分布的一种间接计数方法。B名称型号规格仪器设备1恒温培养箱36℃±1℃，30℃±1℃。2均质器或振荡器3无菌吸管1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。4无菌锥形瓶容量250ml、500ml。5无菌培养皿直径90mm。6菌落计数器7月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptos

2、e，LST）肉汤胰蛋白胨或胰酪胨20.0g氯化钠5.0g乳糖5.0g磷酸氢二钾(K2HPO4)2.75g磷酸二氢钾(KH2PO4)2.75g月桂基硫酸钠0.1g蒸馏水1000mlpH6.8±0.2将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10ml。121℃高压灭菌15min。注：用月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，称取35.6g于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min。双料LST肉汤除蒸馏水外，其他原料加倍。8煌绿乳糖胆盐（Brillian

3、tGreenLactoseBile，BGLB）肉汤蛋白胨10.0g乳糖10.0g牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液200ml0.1%煌绿水溶液13.3ml蒸馏水800mlpH7.2±0.1将蛋白胨、乳糖溶于约500ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200ml（将20.0g脱水牛胆粉溶于200ml蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975ml，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3ml，用蒸馏水补足到1000ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10ml。121℃高压灭菌15min。注：用煌绿乳糖

4、胆盐肉汤，称取40g于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min。9无菌生理盐水氯化钠8.5g蒸馏水1000ml称取8.5ｇ氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。磷酸盐缓冲液磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g蒸馏水500mlpH7.2贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1mol/L氢氧化钠溶液调节，用蒸馏水稀释至1000ml后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25ml，用蒸馏水稀释至1000ml，分装

5、于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。2/2101mol/LNaOHNaOH40.0g蒸馏水1000ml称取40g氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。1mol/LHClHCl90ml蒸馏水1000ml移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释至1000ml，121℃高压灭菌15min。D类别步骤测定步骤1样品的稀释25g(ml)样品+225ml稀释液，均质（1～2min）。（注：样品匀液pH值应在6.5～7.5之间，必要时用1mol/L的NaOH或HCl调节。）10倍系列稀释。每递增稀释一次，换用1次1ml无

6、菌吸管或吸头。（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）（注：从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min）2初发酵试验选择3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种3管LST肉汤管，每管接种1ml（＞1ml，用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。3复发酵试验用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种BGLB管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为

7、大肠菌群阳性管。4大肠菌群最可能数（MPN）的报告按D3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录B），报告每g（ml）样品中大肠菌群的MPN值。E公式参数计算公式备注2/2