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1、槐花药材的含量测定及方法学验证1仪器试剂1.1实验仪器仪器名称规格数量备注药勺2容量瓶25ml16胶头滴管2移液管10ml3移液管1ml4移液管2ml2移液管5ml2具塞锥形瓶150ml12漏斗1烧杯100ml3烧杯250ml2容量瓶100ml12量筒100ml1量筒10ml1玻璃棒2洗耳球21.2实验试剂试剂名称试剂原材料配置方法备注60%乙醇溶液10%硝酸铝溶液9水硝酸铝18.75g蒸憾水87.75g电子天平称取九水硝酸铝18.75g于100mlS瓶中，加入蒸憾水87.75g,混匀，既得。5%亚硝酸钠溶液
2、亚硝酸钠5.00g蒸憾水95ml电子天平称量5.00g亚硝酸钠至于100ml烧杯中，加适"1■水溶解，冷却至室温，转移进入100ml容量瓶，用剩余蒸憎水定容至刻度线。10%氢氧化钠溶液氢氧化钠25.00g蒸憎水225ml电子天平称量25.00g氢氧化钠置于100ml烧杯中，加适量水溶解，冷却至室温，转移进入250ml容量瓶，用剩余蒸懈水定容至刻度线。溶解时候放热槐花药材足量芦丁对照品足量2实验内容2.1线性范围考察2.1.1对照品溶液的制备取芦丁对照品50mg,精密称定，置于25ml量瓶，加60%乙醇适量，置
3、水浴上超声微热溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀。精密量取10ml,置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得浓度为0.2mg/ml的芦丁对照品溶液。2.1.2检测波长的选择取对照品溶液，在dOOnnfeOOnm波长进行光谱扫描，以光谱图最大吸收作为选定波长。图1扫描光谱图2.1.3标准曲线的制备精密量取对照品溶液0ml,lml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml,,分别置于7个25ml量瓶中,各加水使成6ml,精密加5%亚硝酸钠溶液1.0ml,摇匀，放置6分钟，再加10%硝酸铝1.0ml,摇匀,放置6
4、分钟,加入10%氢氧化钠试液10.0ml,加水稀释至刻度，摇匀,放置15分钟（对照品既为空白溶液）。按照紫外可见分光光度法，在选定波长处测定各溶液的吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。表1标准曲线数据记录浓度C0.0000.0080.0160.0240.0320.0400.048mg/ml吸光度A图2芦丁标准曲线图2.2槐花总黄酮含量的测定2.2.1供试品溶液的制备将槐花研碎，取粗粉约lg,精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇100ml,称定重量，60°C超声30分钟，用60%乙醇
5、补足失重，摇匀，过滤，取续滤液10ml,置100讷量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.2.2含量测定精密量取上述供试品溶液3ml,置25ml量瓶中，加水至（5.0ml,加5%亚硝酸钠溶液1.0ml,混匀，放置6min,加10%硝酸铝溶液1.0ml,摇匀，放置6min,加氢氧化钠试液10.0ml,再加水至刻度，摇匀，放置15inin,以相应的试齐1」为空白，在选定波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量（U干燥品计算，含总黃酮以芦丁（C27II30016）计,槐花不得少于8.g）
6、,计算，即得。本品按0%；槐米不得少于20.0%。表2槐花夯材含量测定数据记录样品浓度C（mg/ml）3平均值吸光度A浓度C（mg/ml）百分含量（％）2.3方法学考察2.3.1加样回收试验以测定芦丁含量为准，采用加样回收实验。取样品3份,精密称定0.50份，精密加入芦丁对照品适量（相当于测定含量的80%、100%、120%）瓶中，加60%乙醇100ml,60C超声30分钟，摇匀，过滤，耳平行三次，置于具塞锥形E续滤液10ml,置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml,置于25ml■容量瓶
7、中，加水使成6i】il,精密加5%亚硝酸钠溶液1.0ml,摇匀，放置6分钟，再加10%硝酸铝1.0ml,摇匀，放置6分钟，加入氢氧化钠试液10.0ml,加水稀释至刻度，摇:试剂为空白，在选定波长处测定各浓度的吸光值，计算含量。匀,放置15分钟，以相应加标冋收率二（实验测得量-实验前样甜含量）十加入对照品含量X100%.表3加样回收试验测左数据记录分组吸光度「卅™=回收率％平?回收RSD%率％1234567892.3.2精密度试验精密量取供试品溶液5份，每份3inl,置25ml量瓶中，加水至6.Oml,加5%亚
8、硝酸钠溶液1.0ml,混匀，放置6min,加10%硝酸铝溶液1.0ml,摇匀，放置6min,加氢氧化钠试液10.Oml,再加水至刻度，摇匀，放置15rnin,以相应的试剂为空白，在选定波长处测吸光度，重复测定5次，记录数据并算出RSD。（取同一样品，连续测定五次，相对标准偏差RSD%不得大于3.0%o）表4精密度试验测左数据记录测试次数12345吸光度ARSD%2.3.3重复性试验将槐花研碎，取粗粉
