常用实验试剂配制.doc

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1、1DEPC水(1‰)1000ml水1mlDEPC根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。20.1Mtris(ph7.5)12.114gtris1000mlDEPC水用HCL调ph至7.5，高压备用。34%PFA的配制(ph7.0)40gPFA1000ml0.1mtris(DEPC水配制高压)将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。30.2%甘油/0.1Mtris20ml甘油980ml0.1Mtris420XSSCNacl1

2、75.3g（ph7.0）柠檬酸钠88.2gDEPC水1000ml分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用5HEPES溶液HEPES23.8g(ph6.8-8.0)DEPCH2O100ml650XDenhaldt′s液聚蔗糖（Ficoll400）0.2g聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone)0.2g牛血清蛋白（BSA）0.2gDEPC水20ml7预杂交bufferDeinoizedformanmid5ml20XSSC1.5ml1MHEPES0.5ml50XDenhanldt′s液1ml龟精DNA0.6ml(4ug/ul)DEPC水1.4ml龟精D

3、NA要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。8Washingbuffer(ph7.5)maleicacid5.8gNACL4.4gTween（吐温）1.5ml定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1Mmaleicacid0.15Mnacl0.3%Tween9Maleicacidbuffer(ph7.5)Maleicacid5.8gNacl4.4g定容至500ml溶质的浓度最后分别为0.1Mmaleicacid0.15Mnacl10Detectionbuffer(ph9.5)0.1MTris-Hcl7.9g(9.0g)0.

4、1MNacl2.9g定容至500ml.使溶质的终浓度为0.1MTris-Hcl,0.1Mnacl.8blockingreagent（封闭液）(2-8℃保存)(bottle5)5gmaleicacidbuffer50ml9blockingsolution封闭液（新鲜配制）1mlMaleicacidbuffer10ml10抗体（AP）10000rpm离心5min，吸上清，1：5000稀释，考虑先稀释100倍，用时再稀释。²LB培养基胰化蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10gAmp（100ng/ml）1ml加去离子水950ml搅拌使之完全溶解，用5mol/L的NaOH

5、调PH值至7.0，定容至1L，高压蒸汽灭菌（15磅，1.034×105Pa）30min，4℃保存。²LB琼脂固体培养基LB500mL琼脂粉7.5g高压蒸汽灭菌(15磅，1.034×105Pa)30min，冷却至60℃，加入500mL100mg/mL的氨苄青霉素（Amp），分铺20个平板。²100mg/mL氨苄青霉素（Amp）Amp100mgddH2O1mL用0.2um滤器过滤，-20℃储存。²1M30mg/mL卡那霉素（kana）kana30mgddH2O1mL用0.2um滤器过滤，-20℃储存。琼脂糖凝胶电泳所用试剂²50×TAE(电泳缓冲液)Tris碱242

6、g冰乙酸57.1mL0.5MEDTA（pH8.0）100mL溶于终体积1000mL去离子水中，使用时1：50稀释。²10×加样缓冲液0.25%溴酚兰0.25%二甲苯青30%甘油保存于4℃。²10mg/mLEB溶液取溴化乙锭（EB）0.2g溶解于20mL去离子水中，混匀。4℃避光保存。使用时终浓度为0.5μg/mL。²1%琼脂糖凝胶琼脂糖1g1×TAE100mL微波炉加热至完全溶解，摇匀，当温度降至60℃时，即可铺制平板。ü0.1molCaCl2溶液：1.1g无水氯化钙，溶于90ml三蒸水中，定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌置于灭菌试剂瓶中，4℃保ü氨

7、苄青霉素（Amp）选择性培养基LB培养基中加入1.5%的琼脂（15g/L），高压灭菌20min，取出，在无菌条件下，冷却至50℃左右时（烧手但尚可忍受）加入抗生素或其他必需成分，如为氨苄青霉素（Amp）选择性培养基，则以50mg/ml的氨苄青霉素贮存液按50μg/ml的量加入，即每ml培养基加入1μl氨基苄。ü氨苄贮存液将氨苄青霉素钠溶于三蒸水，配成50mg/ml溶液，以0.22μm滤纸过滤，1ml一份分装，存于-20℃。质粒的少量提取【试剂及配制】1．溶液Ⅰ葡萄糖（C6H12O6·H2O）1.982g三蒸水160ml0.5molEDTApH8.04ml1mol

8、Tris-ClpH8.0