快速学会做药敏试验.doc

《快速学会做药敏试验.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、快速学会做药敏试验一、药敏实验在临床诊断中应用意义：快速学会做药敏试验一、药敏实验在临床诊断中应用意义：快速学会做药敏试验一、药敏实验在临床诊断中应用意义：快速学会做药敏试验一、药敏实验在临床诊断中应用意义：1、在畜牧产业中，各种细菌性疾病很容易给养殖业造成经济损失，使用抗生素防治细菌性疾病成为经常性工作。但在养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗生素，造成细菌产生耐药性问题正变得越来越突出，使抗菌药的疗效降低，疗程延长，还使死亡率升高和治疗费用增加，给养殖业带来巨大经济损失。2、耐药菌株还可能将耐药性基因由动物转移给人类，对人类健康造成潜在威胁

2、。如何避免滥用抗生素，药敏试验在临床诊断中的应用就显得重要了。3、药敏实验可以相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性，指导临床合理用药、灵活选药。可以在本地区容易买到的药品中选出最敏感的药物，既能缩短病程，又能避免盲目用药，减少费用。4、因为药敏实验在动物体外进行，操作相对简单，成本相对较低，既经济又快速有效，可以对流行病学调查进行监控，控制和预防耐药菌株的流行，在生产中具有非常重要现实意义。二、药敏试验的步骤：1、琼脂平板制备按照营养琼脂干粉说明来进行稀释，稀释后琼脂放在微波炉里进行加热，加热后琼脂移至超净工作台中，静置待温度降至5

3、0℃（手指能接受的最高温度）左右时，开始倒平板，内径225px平皿每个平皿倒入约10ml琼脂液，倒入后迅速混匀铺满平皿底部。2、药液制备：按药品使用说明书上的配料或饮水浓度配置按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料，就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数。如10g药物可配50kg饲料，其换算方法为：1g本品加5000ml蒸馏水。此溶液液即为用于做药敏试验的药液。3、药敏纸片制备：要用质量较好的定性滤纸，用普通的打孔器打成直径6mm的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中，以单层牛皮纸扎口或包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后，置

4、于37℃温箱或烘箱中一天，使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0.01ml计，在上述含有50片纸片的小瓶内加入药液0.5ml，不时翻动，使滤纸片将药液均匀吸净，一般浸泡30分钟即可。同时在记录药物名称，于37℃温箱过夜。在温箱或烘箱中的时间不宜过长，以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低温下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮，置阴暗干燥处或家用冰箱中保存，有效期4-6个月。4、病料接种取新鲜病料组织于超净工作台中或酒精灯旁，剪取新鲜组织断面无菌涂抹到营养琼脂板上，涂布整个琼脂平板表面，反复涂布几次，保证涂布均匀。5、贴药敏纸片用无菌镊子将纸片

5、放于固体培养基表面并轻压，使纸片与培养基表面完全接触。为了能准确观察结果，要求药敏纸片均匀分布于培养基上，位置安排适中，防止出现抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于24mm，可在平皿中央贴一片，外周等距离贴7－9片。记住每种药敏纸片的名称。6、温箱培养贴完药敏纸片的平皿倒放在37℃恒温箱中培养24小时以上。三、药敏实验结果观察四、药敏实验选药原则1、在选择高敏药物时还应考虑药物的吸收途径。因为药敏试验是药液直接和细菌接触，而在给畜禽用药时，必须通过机体的吸收才能使药物发挥疗效，所以在给畜禽用药时，高敏药物一定要配合适宜的给药方法，并予以足够

6、剂量、足够疗程，才会取得好的治疗效果。2、药敏试验结果仅为临床选择高敏药物的参考。因动物机体及环境等因素影响，药物的药敏试验与临床治疗效果的符合率一般为70－80%，所以也不能过分地依赖药敏试验。如发现疗效不显著应及时换药。3、药敏试验确定的首选药物不是一成不变。随着药物使用频率的增加及新特药的不断出现，细菌对原先的高敏感药物可能不再敏感。因此，定期进行药敏试验了解本场细菌对抗菌药的敏感性情况是很有必要的。4、窄谱抗生素能解决的问题不选广谱抗生素，一种抗生素可达到治疗作用时，不要用两种药物联合应用。必须应用两种抗生素时，应选择联合应用具有协

7、同作用的药物。5、避开已经使用过的药物或其同类药物，发病期间已用过的药物或同类药物一般不用。五、药敏片的制作药敏片一般可以由厂家提供，也可以自己制作，制作药敏片直接选用各药厂的成品药来做。制作药敏片设备和器皿：需要恒温箱、平皿（直径90mm或更大一点的都行）、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器。具体的操作步骤：1、将滤纸用打孔器打好适量直径为6mm的小圆纸片。2、将所需培养皿或玻璃小瓶、玻璃棒、微量吸管、镊子、滤纸、滤纸片等进行高压灭菌，一般121℃，0.15帕斯卡，15~20min。3、在烘干箱或恒温箱内37～60℃，放置12～24小时直至烘干。

8、4、将要选的药用蒸馏水按药品使用治疗量的比例配制成药液，按5ml药液30~40个小圆纸片浸泡。5、将浸泡好的药敏片用镊子夹出，放到另一干燥平皿中，注意药敏做的多时，放湿药敏片不要