兰花外植体消毒试验初探.pdf

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1、内蒙古农业科技2012(2)：48,,49InnerMongoliaAgriculturalScienceAndTechnology兰花外植体消毒试验初探丁丽t。唐虹2，吴家丽2，李怀情2，鲍菊2(1．毕节职业技术学院。贵州毕节551700；2．安顺市农业科学研究所，贵州安顺561000)擅l：以兰花新芽为组培材料．进行外植体消毒试验。结果表明：外植体用70％自I精浸30s后．于10％次氯砬钠溶液中消毒15一．20nlin或0．5％升汞溶洼q-消毒5-8min，能有效降低外植体污染率。提高成活率。关t词：兰花；外植体；消毒中圈分类号：S醴2．3l文献标识码：A10．3969／j．

2、jssn．1007-4)907．2012．02．025文章编号：100r7—090r7(2012'02-0048--02StudyontheSterilizationofOrchidExplantsDINGIj(BijieVocationalTechnicalCollege，Bijie551700，China)Abstract：Theexplantdisinfectionexperimentadoptsorchidbudsasthetissueculturematerials．Theresultsindicatethat：aftertheexplantissoakedin70％a

3、lcoholfor30s,anddisinfectedin10％帅di啪hypochloritesolutionfor15～20minorinO．5％89Chsolutionfor5～8min，thepollutionmteofexplantcanbeeffectivelyreduced，andthesurvivalratec锄beincreased．Keywords：Orchid；Explant；Disinfection兰花属兰科．是植物王国中的一个大家族．全世界有700属20000余种。国兰在中国栽培历史悠久．目前已发现170属1000余种．在外销贸易上极具竞争力。随着人们生

4、活质量的提高．爱兰养兰人越来越多．兰事活动日趋活跃。整个兰界呈现出一片欣欣向荣景象。养兰不但具有巨大的社会效益，而且具有十分突出的经济效益．我国蕴藏着极其丰富的兰花资源，不少品种在世界上享有盛名。但由于其繁殖率低，栽堵养护技术粗放，不少人只能“望兰兴叹”。因此．选择适宜的培养条件进行兰花的组织培养研究．是发展兰花产业的必由之路。试验主要是选择新芽为外植体，通过外植体消毒时杀菌剂、浓度、时间的搭配，找出最佳、最有效的外植体消毒方法，为组培工作的顺利开展做好铺垫。1材料和方法1．1试验地点安顺市农业科学研究所生物技术组培中心组培室。1．2试验材料所用材料均从安顺和紫云花市收购下山草．

5、杀菌剂用5％次氯酸钠、10％次氯酸钠和0．5％升汞。1．3试验方法采用对比法．选用2种杀菌剂(次氯酸钠和升汞)，3种浓度、4种消毒时间。即5％次氯酸钠(15min、20rain、25min、30rain)、10％次氯酸钠(15min、20rain、25min、30rain)和O．5％升汞(3min、5min．8min、12min)共12个处理，每个处理重复取样30次，每瓶接种1个外植体。IA材料的处理购进带芽兰花．选取4一lOem长新芽，从植株基部切离下来．除去根、脏物和外包叶2—3片，流水充分洗净后．在无菌操净台上用消毒滤纸吸干外植体表面水分．用75％酒精浸30s。再分别用不同

6、消毒液加入2滴吐温一80按不同时间进行消毒处理．最后用无菌水冲洗3—5次(升汞处理至少冲洗5遍)．接种于培养基中，3d后每隔2d观察一次外植体污染、褐化、死亡、成活情况，直到结果不再变化为止。1．5培养基及培养条件选用MS培养基。培养基中添加琼脂79／L，蔗糖309／L，pH=6．O。在23—28℃。光照强度1500k2000Lx。光照时问121rid的培养条件下进行培养。2结果与分析2．15％次氯酸钠不同消毒时间的消毒效果分析从表l可见。5％次氯酸钠溶液消毒时间为15min、20min、25mln、30min，污染率分别为70．0％、66．7％、53．3％、53．3％，褐化率分

7、别为O、O、3．3％、3．3％，成活率为30．o％、33．3％、43．3％、43．3％．由此可见，5％次氯酸钠溶液对兰花外植体消毒随着灭菌时间增加。污染率逐渐减少，但效果不理想，污染率最高达70．0％．最低达53．3％，成活率仅为30．0％-．43．3％。主要由于浓度偏低或处理时间不够，达不到彻底灭菌效果。2．210％次氯酸钠不同消毒时间的消毒效果分析由表I可见，lO％次氯酸钠消毒时间为15min、20min、25min、30min，污染率分别为20％、16．7％、13．3％、1