橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgiculture2016，47(2)：163—168ISSN2095-119l：CODENNNXAABhttp：／／www．nf．yxb．comDOI：10．39690：issn．2095-1191．2016．02．163橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定贺永国1，李哲”，黄绵佳”，曾宪海2，林位夫2，刘洁琼2，张春红2，马晓晓3(1海南大学园艺园林学院，海口570228；2中国热带农业科学院橡胶研究所／农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室，海南儋州571737；3海南大学农学院，海1：2570228)摘要：【目的】克

2、隆橡胶树乳管特异性强启动子HEV2．J(PHEv2．J)，构建天然橡胶生物合成途径关键限速酶基因(HbHMGRj)的乳管特异性植物表达载体，为橡胶树遗传转化奠定基础。【方法1根据已报道的HEV2。J序列(GenBank登录号AY247789．1)设计1对特异引物，采用PCR从橡胶树热研7．33．97基因组DNA中克隆PHEV2．J，与HbHMGRl基因融合构建橡胶树乳管特异性植物表达载体，并以PCR和限制性内切酶酶切进行鉴定。【结果】用特异引物可从热研7．33．97基因组DNA中扩增获得1852bp的PHEV2．J片段，其与AY247789．1启动子序列的同源性为98．6％。将PI-1EV2．

3、j与硪'HMGRj基因融合构建乳管特异性植物表达载体pCAMBIA2301．PHEV2．1-HbHMGRI，经PCR和限制性内切酶酶切鉴定证明植物表达载体构建成功。【结论】将PHEV2．J和HbHMGRI基因先构建至IJpCAMBIA3301载体上再克隆至pCAMBIA2301载体上，能有效解决直接克隆至pCAMBIA2301载体上出现Pstl突变、阻碍载体构建的难题，成功构建获得乳管特异性植物表达载体pCAMBIA2301．PHEV2．1-IToHMGRJ。关键词：橡胶树；乳管特异性启动子PHEV2．』；HbHMGRl基因；植物表达载体；构建；鉴定中图分类号：$794．1文献标志码：A文章编

4、号：2095—1191(2016)02—0163—06ConstructionandidentificationofbinaryvectorcontainingHbHMGRlgenefromlaticiferofHereabrasiliensisHEYong—gu01，LIZhe”，HUANGMian-jia”，ZENGXian—hai2，LINWei-fu2，LIUJie—qion92，ZHANGChun—hon92，MAXiao-xia03(1CollegeofHorticultureandLandscapeArchitecture，HainanUniversity，Haikou57022

5、8，China；2RubberResearchInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences／KeyLaboratoryofRubberBiologyandGeneticResourceUtilization，MinistryofAgriculture，Danzhou，Hainan571737，China；3AgriculturalCollege，HainanUniversity，Haikou570228，China)Abstract：【Objective】111epresentexperimentwasconductedtoclo

6、nespecificstrongpromoterHEy2．I(PHEv2．J)ofHeveabrasiliensislaticiferandconstruct1aticifer’Sspecificplantexpressionvectorcontainingkeyrate-limitingenzymegeneHbHMGRIinnaturalrubberbiosynthesis．inordertolaythefoundationforfurthergenetictransformationofH．brasiliensis．【Method】Accordingtoreportedsequenceof

7、HE睨．J(GenBankAccessionNO．AY247789．1)，apairofspe—cificprime巧Wasdesigned．Thenthepromoter(PHEV2．J)ofHEv2．IgenewasclonedfromgenomicDNAofHbrasiliensisReyan7—33—97bvPCRmethod，andwhichwasfusedwithHbHMGRlgene