铁皮石斛查尔酮合酶基因克隆与表达分析.pdf

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1、南方农业学报JoumalofSouthernAgriculture2016．47(12)：2015—2019ISSN2095—1191：CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．conDOI：10．3969巧：issn．2095—1191．2016．12．2015铁皮石斛查尔酮合酶基因克隆与表达分析孟衡玲，张薇，卢丙越，苏一兰，薛春丽(红河学院云南省高校农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室，云南红河661100)摘要：【目的】克隆铁皮石斛中查尔酮合酶(CHS)基因，分析其基本生物学信息及组织表达特异性，为

2、进一步研究a{s基因在铁皮石斛中的表达调控机理及其在铁皮石斛中的功能打下理论基础。【方法】采用铁皮石斛转录组序列与NCBI同源序列进行比对，根据保守区段设计引物克隆铁皮石斛CHS基因的eDNA全长，采用实时荧光定量PCR定量表达分析不同生长年限、不同组织部位中CHSTj￡因的表达水平。【结果】铁皮石斛CHS；基因cDNA编码区1188bp，编码395个氨基酸，GenBank犀-臀录号KT783451，分子量为43．2kD，理论等电点6．05。铁皮石斛GHS氨基酸序列与同属植物金钗石斛(Dendrobiumnobile)的C

3、HS氨基酸序列同源性最高，达99％，与非同科植物欧洲大叶杨(Populustrichocarpa)、巨桉(Eucalyptusgrandis)和紫玉兰(Magnolialiliiflora)等植物的同源性在83％左右。该基因编码的蛋白质属非分泌蛋白，定位于细胞质基质中，为非跨膜结构的亲水性不稳定蛋白。cHs基因在1年生铁皮石斛叶片中的表达量最高，随着植株年龄的增长，叶片中ajs基因的表达量降低，茎中的表达量升高。【结论】铁皮石斛CHS；基因早期主要参与激素运输和器官形态建成，后期主要参与类黄酮物质合成。关键词：铁皮石斛；查

4、尔酮合成酶；基因克隆；实时荧光定量PCR中图分类号：S567．239；Q785文献标志码：A文章编号：2095一1191(2016)12—2015—05⋯1●一1■‘1Cloninganllexpresslon0ICIIalC0nesyntnase2enefromDendroⅨ啪。掰cinaleMENGHeng—ling，ZHANGWei，LUBing-yue，SUYi-lan，XUEChun—li(KeyLaboratoryofHighQualityCropsCultivationandSafetyControl，Hon

5、gheUniversity，Honghe，Yunnan661100，China)Abstract：【Objective】Thepresentstudyclonedchalconesynthase(CHS)geneandanalyzeditsbasicbiologicalinfor-mationandtissue-specificexpressioninDendrobiumofgcinale，inordertolayatheoreticalbasisforfurtherresearchonthefunctionandexpr

6、essionregulationmechanismofCHSgeneinD．offieinale．【Method】ComparingconservedsequencewithNCBIhomologoussequence，real-timefluorescencequantitativePCRwasadoptedtoanalyzeCHSgeneexpressionindifferenttissuesatdifferentgrowthyearsbasedOncDNAfulllengthofdesign-primer——clon

7、edCHSgeneinconserveddo·-main．【Result]ThecodingregionofCHSgeneinD．ofljcinalewas1188bpencoding395aminoacids，molecularweightwas43．2kD，theoreticalisoelectricpoint6．05，GenBankaccessionnumberKT783451．Intermsofaminoacidsequence，CHSinD．ofllcinaleshowedtIlehighesthomology(

8、99％)withthatinDendrobiumnobHe，itssamegenericplant．ThehomologybetweenCHSsequenceinD．offieinaleanditsnon-familyplantsPopulushffehocarpa，Eucalyptusgrandisa