大鼠基质金属蛋白酶2试剂盒说明书

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1、大鼠基质金属蛋白酶2试剂盒说明书大鼠基质金属蛋白酶-2（MMP-2）酶联免疫分析（ELISA）　　　　试剂盒使用说明书　　本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆,　　上清及相关液体样本中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的含量。　　实验原理：　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠基质金属蛋白酶2（MMP-2）水平。用纯　　大鼠基质金属蛋白酶2（MMP-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔　　次加入基质金属蛋白酶2（MMP-2），再与HRP标记的MMP-2抗体结合，形成抗体-　　酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后

2、加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成　　并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的基质金属蛋白酶2（MMP　　正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人　　基质金属蛋白酶2（MMP-2）浓度。　　试剂盒组成：　　试剂盒组成48孔配置96孔配置保　　说明书1份1份　　封板膜2片（48）2片（96）　　密封袋1个1个　　酶标包被板1×481×962-8℃保　　标准品：450μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保　　标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保　　

3、酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保　　样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保　　显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保　　显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保　　终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保　　浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保　　样本处理及要求：　　1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收　　清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。　　2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20

4、分钟后，　　20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该　　离心。　　3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存　　中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。　　4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-30　　分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，　　浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20　　钟左右（2000-3000

5、转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。　　5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备　　用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器　　将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待　　检测，其余冷冻备用。　　6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上　　进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.　　7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3

6、抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。　　操作步骤：　　1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标　　准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二　　孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，　　混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔　　中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各　　取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加

7、标准品稀释液50μl，混　　匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准　　品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，　　浓度分别为300μg/L，200μg/L，100μg/L，50μg/L，25μg/L）。　　2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样　　品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样　　品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混　

8、　匀。　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。　　4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩