高温木质素降解菌Geobacillus caldoxylosilyticus J16的筛选及其产酶发酵性质研究.pdf

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterIsolationofLigninDegradedThermophilicGeobacillusCaldoxylosilyticusStrainJ16andCharacteristicsofItsEnzymesandFermentationByGuoguoJinSupervisor：Prof．HaiboWengPro￡TuanshengShiBiologyChemist

2、ryandMoleculeBiologyBiologyEngemeeringDepartmentMay2011【llIIfITIIIIirflIrlIfl!Y1929697原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：毛擎累日期：加，／年多月7日学位论文使用授权声明本人在导师指

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4、中，在65。C高温的条件下，经分离、纯化后，获得了若干株能降解木质素的菌株，选出其中透明圈最大的菌株，在BM平板上打若干小孔，滴入其粗酶液，然后用1％的三氯化铁和铁氰化钾染色，用0．9％的生理盐水脱色后选出透明圈最大的菌株。在BM液体培养基中，将该菌培养过夜，取其粗酶液滴入CMC平板的孔中，经刚果红染色后，发现该菌不降解纤维素。扩增其16S保守序列，鉴定为地芽孢杆菌，命名为GeobacilluscaldoxylosilyticusJ16，此菌嗜热，耐高温，只降解木质素且不降解纤维素，对造纸业和可再生能源产业具

5、有重要意义。地芽孢杆菌GeobacilluscaldoxylosilyticusJ16经革兰氏染色后，显示为阳性，镜检菌体呈杆状。菌株在50℃．65℃的条件下均可生长。本文通过对木质素中两种酶即木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶活性的研究，确定了木质素过氧化物酶的最适温度和pH分别是为65℃和4．O，培养96个小时和接种量为5％时，酶活力最大，在55℃至70"C之间时酶活力较其他温度高且较稳定；锰过氧化物酶最适温度为60℃，最适pH为3，在温度为55。C至65℃之间时，活力较其他温度高。作者发酵了黄豆杆、玉米杆、

6、芝麻杆、油菜杆、锯末、小麦杆这六种农、林废弃物，通过发酵前后的比较，说明了J16菌株对木质素降解的最大减少量为8．7％。上述数据显示此菌可以应用于废弃秸秆的处理和造纸厂污水的处理，对环保有重要意义。关键词：高温；木质素降解菌；酶活性；木质素含量AbstractWehavescreenedofsomehermostablelignindegradingmicroorganismsfromthedecayedagriculturalwastesmixed、析nldomesticatedanimalsemit．we

7、screenedthebiggestdiameterofclearancezonefromthemicroorganismson也eBMculture．A11themicroorganismswereheat-resistingstrains．ItsfactorsWasthermophilic，CMCagarplatesandCongoredstainingmethodweresequentiallyusedforlignindegrading’Sscreening，aftertheexpedment，wef

8、oundthatitcouldnotdegradethecellulose．WegavethisstrainthenameofGeobacilluscaldoxylosilyticusstrdmJ16．ItWaSsignificanceforpaperindustryandrenewableenergyindustry．Thefactorswerestudied,whicheffectedonlfg