利用纳米金颗粒作为指示剂的胰岛素水解模拟过程监测分析.pdf

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1、第42卷第6期研究与开发化工设计通讯2016年6月ResearchandDevelopmentChemicalEngineeringDesignCommunications利用纳米金颗粒作为指示剂的胰岛素水解模拟过程监测分析1233朱黎琴，俞明华，江宇峰，朱春莲（1.义乌市水处理有限责任公司，浙江义乌322000；2.嘉善绿野环保材料厂，浙江嘉兴314000；3.浙江水知音检测有限公司，浙江嘉善314100）摘要：利用7~10nm的纳米金颗粒作为指示剂，利用胰蛋白酶作为水解酶，建立了体外胰岛素水解模拟

2、过程，并实现了对胰岛素体外水解模拟的检测。利用透射电子显微镜和扫描电子显微镜观察了纳米金颗粒与胰岛素分子的作用和胰蛋白酶水解胰岛素后的形态变化，证实了体外水解的发生过程，最后使用紫外吸收法测定了胰岛素体外水解的程度。关键词：胰岛素；胰蛋白酶；纳米金；水解；检测中图分类号：R914文献标志码：A文章编号：1003–6490（2016）06–0104–02MonitoringandAnalysisoftheSimulationProcessofInsulinHydrolysisUsingGoldNanop

3、articlesasIndicatorZhuLi-qin，YuMing-hua，JiangYu-feng，ZhuChun-lianAbstract：Usesgoldnanoparticles7-10nmasanindicator，asthehydrolasetrypsin，establishedinvitroinsulinhydrolysissimulationprocess，andrealizethesimulationforthedetectionofinsulininvitrohydrolysi

4、s.UsingtransmissionelectronmicroscopeandscanningelectronmicroscopetoobservethemorphologicalchangesofgoldnanoparticlesandinsulinmoleculesandTrypsinHydrolysisafterinsulin，confirmedtheinvitrohydrolysisprocess，andfinallytheuseofUVabsorptionmethodforthedeter

5、minationofinsulininvitrohydrolysisdegree.Keywords：insulin；trypsin；goldnanoparticles；hydrolysis；detection胰岛素是由胰脏内的胰岛β细胞受内源性或外源性物质mL的胰蛋白酶溶液，分别取10µL，50µL和100µL加入到配如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分制好的insulin@Au溶液中，室温下进行水解反应24h。[1-3]泌的一种蛋白质激素。胰岛素是机体内唯一降低血糖的激电子显微镜实验

6、：将上述各种溶液离心（10000转，素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。因此，检测和监测10min），分离上层清夜，并且将离心得到的沉淀再次溶解于生物体内胰岛素的水解过程是生化分析检测研究中的一个重初始体积的纯水中。得到的样品分别进行UV，SEM和TEM[4-6]要的研究内容。本文提出一种新型的利用纳米金颗粒作为的实验。指示剂的胰岛素水解模拟过程监测分析方法，能够快速简便2结果与讨论地开展胰岛素体外水解模拟分析。2.1胰岛素-纳米金及胰岛素-胰蛋白酶水解体系的建立1实验过程如图1所示，蓝色线条为纳米金

7、溶液的紫外吸收图，从图1.1实验材料和仪器中可以看出实验合成的纳米金颗粒在520nm处有明显的吸收氯金酸，柠檬酸钾，硼氢化钠，十六烷基三甲基溴化铵，峰，而红色线条为实验配制的胰岛素溶液的紫外吸收图。从图抗坏血酸溶液，PBS缓冲溶液均购于国药试剂有限公司（上海）；中够可以看出胰岛素溶液在300～800nm范围内并没有明显胰岛素（Insulin），胰蛋白酶（trypsin）购于上海生工生物。的紫外吸收，纳米金的特征吸收峰和胰岛素溶液的无干扰为本透射电子显微镜（TEM）HitachimodelH-800（工

8、作电压实验的顺利开展奠定了基础。当胰岛素分子与纳米金颗粒相互100kV）和扫描电子显微镜（SEM）Quanta400F用来表征作用后，特征吸收峰明显红移，如图1中的绿色线条所示，但胰岛素-纳米金体系形态；紫外-可见分光光度计UV-1700是峰强度保持不变。当向溶液中加入胰蛋白酶后，峰强度发生PharmaSpecUV-Visspectrophotometer（日本岛津公司）用来测明显下降，如图1纳米金颗粒（蓝线），胰岛素溶液（红线），定溶液的紫外吸；pH5