药品微生物限度检查法.ppt

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1、药品微生物限度检查法吉林省食品药品检验所2008.3.29长春微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原、辅料受微生物污染程度的方法，也是评价生产企业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。检查项目包括染菌量及控制菌检查。7/22/20212微生物限度检查法起草的指导思想较完善检查法：也是目前国际上常用的一种方法。是以琼脂平板上的细菌、霉菌或酵母菌形成的一个独立可见的菌落为计数依据。该法测定结果只反映在规定条件下所生长的细菌、霉菌和酵母菌的菌落数。增加试验的可操作性使方法更具科学性，保

2、证检验结果的准确性。7/22/20213检验全过程应严格遵守无菌操作，在环境洁净度10000级和局部洁净度100级单向流空气区域内进行，以防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按中华人民共和国国家标准GB/T16292～16294-1996《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》进行洁净度验证。操作环境7/22/20214洁净级别洁净级别尘粒数/m3浮游菌个/m2沉降菌个/0.5h微粒直径≥0.5um微粒直径≥5um100≤3,500≤0≤5≤110000≤350,000≤2000≤100≤31

3、00000≤3,500,000≤20,000≤500≤107/22/20215检验量检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的3倍量供试品。除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；中药膜剂为50cm2贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品其检验量应增加10g或10ml7/22/20216供试液的制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验

4、用培养基，不得超过1小时。除另有规定外，常用的供试品制备方法如下：7/22/20217（1）液体供试品取供试品10ml,加稀释剂至100ml中混匀，作为1:10供试液。水溶性液体制剂可用混合的供试品原液直接作为供试液。（2）固体、半固体或黏稠性供试品取供试品10g加稀释剂至100ml中，用匀浆仪或其它适宜的方法，混匀后，作为1:10供试液。供试液的制备7/22/20218非水溶性供试品取供试品5g(5ml)，加入司盘805g、单硬脂酸甘油酯3g、聚山梨酯8010g的无菌溶化混合物（温度低于45℃）的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成

5、团后，慢慢加入45℃左右的稀释剂至100ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1:20供试液。特殊供试液制备方法7/22/20219特殊供试液制备方法取供试品10g，加至含玻璃珠和20ml的无菌十四烷酸异丙酯的容器中，充分振摇，使供试品溶解，再加入约45℃的稀释剂，振摇5-10分钟，萃取，待油水明显分层，取其水层作为1:10供试液。十四烷酸异丙酯的灭菌方法：采用薄膜过滤法除菌，选用孔径为0.22um的脂溶性滤膜，在140℃干热灭菌2小时。7/22/202110特殊供试液制备方法非水溶性膜剂供试品取50cm2,剪碎，加适量

6、的稀释剂（通常为每1ml或每2ml含1cm2）,浸泡，振摇，以供试品浸液作为1:10或1:20供试品。7/22/202111特殊供试液制备方法肠溶及结肠溶制剂供试品取供试品10g，加至100mlpH6.8磷酸盐缓冲液（肠溶制剂）中或pH7.6磷酸盐缓冲液（结肠制剂），置45℃水浴中，振摇，使溶解，作为1:10的供试液。7/22/202112特殊供试液制备方法具抑菌活性的供试品当供试品有抑菌活性时，应消除其抑菌活性后，再依法检查。常用的方法有：　　培养基稀释法　　　　　离心沉淀集菌法3000转/分离心20分钟，500转/分离

7、心5分　　　　薄膜过滤法　　　　中和法7/22/202113菌数报告规则细菌数　酵母菌平均菌落数在30-300，霉菌平均菌落数在30-100之间的稀释级作为菌数报告的依据。当仅有１个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。7/22/202114菌数报告规则当同时有2个稀释级的菌落数符合上述规定时，视两者比值（比值为高稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值除以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值　）而定。若比值不大于2，以两稀释级的菌落数乘以稀释倍数的均值报告菌数；若比值大于2但不超过5时，以低稀释级的菌

8、落数乘以稀释倍数的值报告菌数。当出现比值大于5或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时，应查明原因再行检查，必要时，应进行方法的重新验证。7/22/202115菌数报告规则当各稀释级的平均菌落数均小于30，以最低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。各稀释级的平板均无菌落生长，或仅