高效液相色谱法检测速溶咖啡中的丙烯酰胺.pdf

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1、982013年第6期高效液相色谱法检测速溶咖啡中的丙烯酰胺吕昱严敏刘礼祥（贵州民族大学）摘要：本文建立了测定速溶咖啡中丙烯酰胺含量的高效液相色谱方法。采用纯水作提取剂，样品经正己烷去脂、涡旋振荡、离心沉淀、高速冷冻离心、过SPE小柱净化后，最后采用Agilent1260series高效液相色谱仪进行测定。该方法的色谱条件为流动相：乙腈：水(v:v,4:96)；流速为1ml/min；进样量为20μL；检测波长为200nm；柱温为28℃。该方法标准曲线的相关系数为0.99959。该方法具有样品处理简单、灵

2、敏、测定周期短、准确度比较高，适用于大量样品的快速筛选，测定。关键词：速溶咖啡丙烯酰胺检测高效液相色谱1.3样品来源一、引言速溶咖啡为市场上所购多个品牌样品，所有样品均存放于3℃冰箱内。随着国家不断的发展，人民生活水平不断的提高，咖啡这种1.4色谱条件“洋货”早已渗入了普通百姓的日常生活，他口味与真实咖啡味流动相为乙腈：水(v:v,4:96)；流速为1mL/min；保留时间为接近且冲泡方法简单，因此速溶咖啡销售量远比传统咖啡大，但1.50min；测定波长为200nm；柱温：28℃；进样体积为20μL。

3、多数人并不知道的是，速溶咖啡中有一种潜在杀手“丙烯酰胺”。1.5样品前处理2005年，中华人民共和国卫生部发布公告：丙烯酰胺是致癌物准确称取1g均质化样品，精确到0.01g，置于10mL具塞玻质，由中国疾病预防控制中心营养与食品安全研究所提供的资璃离心管中，用纯水定容至刻度，加少量正己烷进行去脂处理，料显示，速溶咖啡含丙烯酰胺。丙烯酰胺是一种用途广泛的重要于漩涡振荡器上振荡10min，然后4000r/min离心10min，吸取下有机化工原料，是一种中等毒性的亲神经毒物，可通过未破损的层水相3.0mL到

4、离心管中，在0℃15000r/min高速离心15min，皮肤、粘膜、肺和消化道进入人体，分布于人体液中，丙烯酰胺的吸取2.0mL下层水相过柱净化。SPE净化：AccuBondSPE神经毒性已经为许多学者所公认，孙凤祥等人[8]的研究表明，丙(1000mg,6mL)柱用3.5mL甲醇、3.5mL水活化，取2.0mL提取液烯酰胺急性中毒后，可使神经细胞产生炎性水肿，最终导致细胞到SPE柱，用0.5mL水冲洗，用2.0mL水洗脱，收集全部流出液，死亡。因此尝试建立高效液相色谱法检测速溶咖啡中的丙烯酰过0.4

5、5μm滤膜后储存于3℃冰箱备用。胺，为将来检测速溶咖啡中丙烯酰胺的含量提供重要的参数，对2、实验结果人类健康具有重要的意义。目前食品中丙烯酰胺的测定方法主1.标准曲线线性要以仪器分析为主，一般的化学分析不能达到食品分析的要求。将丙烯酰胺标准品用纯水配制成0.05、0.10、0.20、0.30、经过一定的萃取、净化处理后，采用气相色谱（GC）、高效液相色0.40μg/mL的标准溶液系列，按其定好的高效液相色谱条件测谱（HPLC)、质谱（MS）及三者联用进行定性定量检测是当前通用定，在0.05~0.40μ

6、g/mL浓度范围内呈线性关系，以浓度(μg/mL)为的检测手段，GC-MS联用和HPLC-MS联用技术大大提高了测横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，标准曲线的线性方程定的灵敏度和准确度，但对仪器设备的要求较高[9]，且GC-MS为Y=423.07X+1.0342，相关系数r=0.99959。法需要进行衍生化，实验步骤繁琐且可能因不定因素导致衍生2.样品测定化失败。LC/MS/MS虽然具有较高的灵敏度和准确性，但仪器价测定了5份不同的市售速溶咖啡和咖啡豆研磨成的咖啡格和维护成本过高，不利于推广运用，

7、HPLC法具有相对成本低，粉，其中2号为海南春光速溶咖啡，5号为雀巢速溶咖啡，6号为样品前处理过程比较简单，分析比较快速、灵敏，准确度比较高咖啡豆研磨成的咖啡粉，其余为不知名品牌咖啡，每个样品平行等特点。因此本次研究采用了高效液相色谱(HPLC)法测定结果，测定3次，有的咖啡样品不含丙烯酰胺，有的咖啡样品含少量丙配合新型小颗粒ZORBAXEclipsePlus-C18液相柱，分离效果、烯酰胺，从检验结果来看首先咖啡豆所研磨的咖啡粉并不含丙速度、灵敏度，准确度等比较高，基本上满足了我国“十一五”国烯酰胺

8、，而海南春光速溶咖啡和雀巢速溶咖啡也未检出丙烯酰家重大科技专项“食品安全关键技术”课题有关建立食品中丙烯胺，可见这两种品牌速溶咖啡在加工工艺上处理到位，而其他不酰胺测定方法的要求，适用于日常检测，可以进一步推广[12]。知名品牌咖啡则含少量丙烯酰胺。二、实验部分三、讨论1、材料与方法丙烯酰胺在水中的溶解度较大(2155g/L)，水是丙烯酰胺的理1.1仪器和设备想的提取溶剂，用水提取还可以去除速溶咖啡中的大量有机物。美国安捷伦公司1260高效液相色谱仪配紫