A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达、纯化及鉴定.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgriculture2016．47(2)：301—305ISSN2095—1191：CODENNNXAABhttp：Ilwww．nfny】【b．cornDOI：10。3969／j：issn．2095—1191。2016．02．301A型口蹄疫病毒结构蛋I兰tVPl的原核表达、纯化及鉴定颜健华1，何奇松1，蒋家霞1，冯淑萍·，黄胜斌-，韦达有z，易春华z，许瑞胜3，梁晟-，熊毅r(1广西动物疫病预防控制中心，南宁530001；2桂林市动物疫病预防控制中心，广西桂林541002；3崇左市动物疫病预防控制中心．广西崇左532200)摘要：【目的】

2、通过原核表达及纯化获得A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VPl，为建立A型FMDV的ELISA诊断方法及开发安全、高效、广谱的新型基因工程疫苗提供技术支持。【方法】以含A型FMDVVPl基因的重组质粒pMDl8一T—A-VPl为模板，通过特异性引物扩增A型FMDV的VPl基因，构建表达质粒pET一32a．vH和pGEX一6p．1．VPl．然后转入感受态细胞E．coliBL21(DE3)中诱导表达融合蛋白。【结果】诱导表达获得的VPl融合蛋白主要以包涵体形式存在，分别经His·Bind和GST·Bind柱层析纯化，SDS—PAGE分析结果表明融合蛋白纯度较高；Westernblotting

3、检测分析发现，VPl融合蛋白能与豚鼠抗A型FMDV阳性血清发生特异性结合，但不与豚鼠抗O型和Asial型FMDV阳性血清反应。【结论】经原核表达及纯化获得的A型FMDVVPl融合蛋白具有良好的特异性和抗原性，可用于易感动物的免疫及血清抗体筛查。关键词：A型FMDV；VPI蛋白；原核表达；纯化；鉴定中图分类号：$852．659．6文献标志码：A文章编号：2095—1191(2016)02—0301—05Prok：yoticpression，purificationandidentificationFrogaryoticexpressionpurincationandiaentificati

4、on，ofstructuralproteinVPloffoot-and·—-mouthdiseasevirusserotypeAYANJian—hual，HEQi-song1，JIANGJia-xial，FENGShu—ping1，HUANGSheng—binl，WEIDa-you2，YIChun-hua2，XURui-shen93，LIANGShen91，XIONGYil+(IGuangxiCenterforAnimalDiseasePreventionandControl，Nanning530001，China；2GuilinCenterforAnimalDiseasePrevent

5、ionandControl，Guilin，Guangxi541002，China；3ChongzuoCenterforAnimalDiseasePreventionandControl，Chongzuo，Guangxi532200，China)Abstract：【Objective】ThepresentexperimentwasconductedtoobtainVPlproteinoffoot-and-mouthdiseasevirus(FMDV)serotypeAthroughprokaryotieexpressionandchromatographicpurification，ino

6、rdertoprovidetechnicalsuppoflforestablishingELISAmethodtodetectFMDVserotypeAanddevelopingasafe．efficientandbroad--spectrumgeneticengineer-ingvaccine．【Method】UsingrecombinantplasmidpMDI8T—A—VPIastemplate，theⅥ’JgenewasamplifiedfromFMDVserotypeAwithspecificprimers．AndtheexpressionplasmidPET．32a-yPJa

7、ndpGEX-6D-1一V纠wereconstructedandtrans—feredintoEschedchiacoljBL21，thenE．coljBL21wasinducedtoexpressfusionprotein．【Resuh】Theresultsshowedthat．theobtainedfusionproteinVPlexistedmainlyinthefoFillofinclusionbody．AndtheSDS．