胃泌素对胃癌细胞SGC7901 RegⅠ基因转录因子的效应.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectsofgastrinonRegIgenetranscriptionfactorsingastriccancercellSGC7901ByYanfangWuSupervisor：Prof．YiDingDepartmentofHistoembryologyBasicMedicalCollegeMay2011明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文

2、不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月同学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位

3、论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日7901RegI基因转录因子的效应研究生吴艳芳导师丁一郑州大学基础医学院组织胚胎学教研室郑州450001摘要研究背景和目的世界范围内，胃癌是第2大癌症相关死亡原因。胃癌的发生是1个复杂、多步骤、多因素的事件，很多致病因子可以促进胃癌的发生和发展。胃泌素(gastrin)可能在胃癌发生中具有重要作用。胃泌素通常由胃窦和十二指肠近端黏膜的G细胞分泌，主要通过与胃泌素受体结合来实现其效应。胃泌素能刺激胃酸分泌和胃上皮细胞的增殖，并能

4、使壁细胞和ECL细胞的数量增加，与胃癌的形成和生长有关。RegI(regeneratingI)是Reg再生蛋白基因家族的l员。国外近年的研究表明，RegI蛋白在胃癌组织中高表达；RegI基因的表达与胃癌的分化程度、浸润性生长的程度以及患者的预后情况均存在相关性。胃癌细胞中，胃泌素可以促进RegI基因的表达。前期的研究表明，RegI基因沉默的胃癌细胞，胃泌素促进胃癌细胞生长的效应明显下降，RegI基因可能是胃泌素促进胃癌细胞生长通路的关键下游基因。但是，胃泌素调控RegI基因表达的分子机制尚不清楚。真核细胞的转录调控由顺式作用元件(cis．a

5、ctingelements)和反式作用因子(trans．actingfactors)相互作用实现。后者又称为转录因子(transcriptionfactors，TFs)，它能够识别特定的DNA顺式作用元件并与之结合，从而调控细胞的基因表达，对细胞增殖及肿瘤形成、转化和凋亡有很大的影响。本研究应用巢式PCR技术克隆RegI基因上游启动子1414bp片段，应用随机引物法以地高辛标记RegI基因启动子片段为探针。应用Southwesternblot技术观察胃泌素对胃癌细胞SGC7901RegI基因转录因子的效应，探讨胃泌素促摘要进胃癌细胞RegI

6、基因表达的分子机制。材料与方法1．克隆RegI基因启动子应用巢式PCR技术以胃癌细胞SGC7901基因组DNA为模板扩增RegI基因启动子1414bp片段，将扩增片段插入T载体，XbaI／PstI双酶切、菌液PCR及测序鉴定。2．探针制备将RegI基因启动子1414bp片段及其HindIII酶切后的近端614bp(一573／+41)和远端800bp(-1373／．574)片段，应用随机引物法以地高辛标记为探针，应用DNA斑点杂交法检测探针的灵敏度。3．胃泌素孵育胃癌细胞将培养的胃癌细胞SGC7901随机分为3组：实验组1，加入终浓度为10{

7、mol／L胃泌素的培养液；实验组2，加入终浓度为10’7mol／L胃泌素的培养液；对照组，不含胃泌素。培养48h，分别提取核蛋白。4．Southwesternblot3组胃癌细胞核蛋白经SDS．PAGE电泳后，转移到PVDF膜。分别应用1414bp、近端614bp和远端800bp探针进行Southwestern印迹实验，检测3组细胞核蛋白对探针的结合效应。各条带的灰度值应用QuantityOne软件进行分析。5．统计学分析实验数据以均数4-标准差表示，应用SPSS11．5统计软件进行分析。总体均数的比较采用单因素方差分析，多个样本均数的两两

8、比较采用LSD．t检验。以P<0．05为差异有统计学意义。6．RegI基因启动子的TFs结合位点分析应用Matlnspector在线分析软件分析RegI基因启动子1414bp片段