组织型纤溶酶原激活物在视网膜新生血管形成中的作用研究.pdf

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1、第二军医大学组织型纤溶酶原激活物在视网膜新生血管形成中的作用研究Roleoftissue--typeplasminogenactivatorinretinalneovascularization研究生：李婧指导老师：赵世红教授培养单位：第二军医大学长海医院眼科二O一一年五月l％．i’}-_-；独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：日期：年

2、月日学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文全文或部分内容编入《中国学位论文全文数据库》、《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》等数据库进行检索。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日／第一部分t-PA及其抑制剂PAl．1在缺氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的动态表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯．9．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9-结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-15-讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-22-结{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-25一第二部分PAl．1对视网膜血管内皮细胞增殖、迁移及血管形成相关因子表．达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．一26一材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．-2

4、6-结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．一34一讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-40-结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-42-参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-43·全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．-51．综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．-52一发表论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．-60一致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．-61—组织型纤溶酶原激活物在视网膜新生血管形成中的作用研究摘要【目的】观察小鼠视网膜新生血管发生过程中组织型纤溶酶原激活物t．PA的表达情况及意义，探讨t．PA对视网膜新生血管发生和发展的影响。【方法】1、采用生后7天的c57BL／6J小鼠58只，随机分为缺氧模型组与正常对照组，每组29只(58只眼)。其中用于荧光素血管灌注视网膜铺片的缺氧模型组与正常对照组每个时间点(P12、P14、P17、P21)各3只(61]1曼)，用于RealTimePCR检测

6、每个时间点(P12、P14、P17、P21)各3只(6眼)，用于视网膜病理切片HE染色在P17各5只(10眼)。2、建立RF／6A细胞的正常及缺氧培养模型，在上清液中加入PAl．1，用ELISA检测的方法，定量分析细胞的VEGF表达，确定最佳PAI．1抑制浓度。用Transwelld、室法检测PAI．1对RF／6A细胞迁移的影响；用MTT法检测PAI．1对RF／6A细胞增殖的影响；用RT-PCR和Westernblot检测PAI．1对RF／6A细胞VEGF和ANXA2的表达影响。【结果】1、FITC．Dextran灌注视网膜铺片造影可以清楚、完整的显示小鼠缺氧模型组中视

7、网膜血管无灌注区、血管渗漏、新生血管形成等视网膜血管病变。正常对照组小鼠在生后12、14、17、21天视网膜血管分布均匀，无异常改变。缺氧诱导组小鼠在生后12天可见视网膜大面积的无灌注区，仅周边部形成小面积的血管网；生后14天血管扩张，可见部分渗漏及少量微动脉瘤形成；生后17天血管明显迂曲、扩张，灌注区与无灌注区交界处发现大量的新生血管丛、微血管瘤及渗出，这种血管反应持续到生后21天。视网膜病理切片：在生后17天的小鼠正常对照组中很少见到突破视网膜内界膜的血管内皮细胞，对突破内界膜的血管内皮细胞核进行计数统计，平均为0．64+0．09／片