脱壳病和吻肿病东风螺体内致病菌及条件致病菌菌相研究.pdf

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1、第31卷第2期2013年4月海洋科ADVANCESIN学进展MARINESCIENCEV01．31NO．2April，2013脱壳病和吻肿病东风螺体内致病菌及条件致病茵茵相研究李淑芳1，邱德全2，张继东H，杨世平2，贾春红1，邱明生2(1。广东海洋大学动物医学系，广东湛江524088；广东海洋大学水产学院，广东湛江524088)摘要：为探讨东风螺脱壳病和吻肿病与体内外致病菌及条件致病菌的相关性，测定了东风螺养殖水体环境中异养菌菌落总数，并对病螺及健康螺体内致病菌及条件致病菌进行了分离鉴定。经兔血培养基、TCBS培养基和弧菌显色培养基分离培养，用生化试验和细菌16Sr

2、DNA序列分析鉴定，结果显示：发生脱壳病的方斑东风螺螺池水体中的异养菌菌落总数为1．34×106cfu／mL，病螺体内分离的致病菌及条件致病菌有副溶血弧菌、哈氏弧菌、河流弧菌、Vibriohepatarius、腐败希瓦氏菌、海藻希瓦氏菌和芽孢杆菌，其中优势菌株为副溶血性弧菌溶血菌株和哈氏弧菌；脱壳病与吻肿病共患的泥螺螺池水体中异养菌的菌落总数为1．46×107cfu／mI。，病螺体内分离的致病菌及条件致病菌有副溶血弧菌、哈氏弧菌、鲍鱼希瓦氏菌、海藻希瓦氏菌和芽胞杆菌，优势菌株为海藻希瓦氏菌、鲍鱼希瓦氏菌和哈氏弧菌；健康东风螺螺池水体异养菌菌落总数为7．6×104cf

3、u／mI。，健康东风螺螺体内的优势菌株为副溶血性弧菌非溶血菌株和Vibriohepatarius。试验结果表明，东风螺脱壳病和吻肿病与养殖水体环境中异养菌的总数及螺体内部致病菌及条件致病菌分布具有一定相关性。关键词：东风螺；脱壳病；吻肿病；致病菌和条件致病菌；菌相；16SrDNA序列中图分类号：$944．4—9文献标识码：A文章编号：167卜6647(2013)02—026607东风螺(Babyloniaareolata)属软体动物腹足纲、蛾螺科、东风螺属。我国的主要养殖品种有方斑东风螺(Babyloniaareolata)、泥东风螺(Babylonialutosa

4、)和台湾东风螺(Babyloniaform05ae)三种。2000年以来，东风螺在我国广东、海南、福建等南海地区已实现人工规模化养殖。目前，对东风螺规模化养殖危害严重的主要疾病为脱壳病和吻肿病。东风螺脱壳病在我国首次发生于2002年，且在2004年出现较大规模暴发，至今在东风螺养殖场时有发生，发病率可高达80％以上，具有传染性和复发性[1]。为探讨东风螺脱壳病和吻肿病与条件致病菌的相关性，从2011年开始，本课题组对广东省湛江市某大型东风螺规模化养殖场发病螺池和未发病螺池的水样进行了异养菌菌落总数检测，并对脱壳病和吻肿病病螺以及健康螺进行了条件致病菌的分离与鉴定，以

5、期找出东风螺脱壳病、吻肿病与致病菌及条件致病菌感染的相关关系，为东风螺疾病的病因学研究和防治技术研究提供科学依据。1材料与方法1．1试验材料1．1．1样品采集2011年，湛江市某东风螺养殖场(循环水养殖)，方斑东风螺发生脱壳病，同场养殖的泥东风螺发生脱壳收稿日期：2012-05—14资助项目：广东省海洋渔业局科技推广专项——工厂化养殖、池塘、潮下线海区规模化养殖方斑东风螺(A201101101)作者简介：李淑芳(1964一)，河北石家庄人，女，博士，教授，从事动物微生物与免疫学方面研究．Email：lishufan90816@126．corn*通讯作者。E—mail

6、：ZJD0305@126．corn(王佳实编辑)2期李淑芳，等：脱壳病和吻肿病东风螺体内致病菌及条件致病菌菌相研究267病和吻肿病混合感染。选择脱壳病方斑东风螺养殖池、脱壳病一吻肿病混合感染的泥东风螺养殖池和未发病的方斑东风螺养殖池各1个，每池采集水样各200mI。。从脱壳病方斑东风螺池选取5只脱壳后健活的软体螺，从脱壳病一吻肿病混合感染螺池选取5只吻肿病螺，从未发病方斑东风螺螺池选择临床健康螺5只，分别放人盛有适量原池水的灭菌三角瓶备检。1．1．2主要试剂与培养基MightyAmp@DNAPolymerase试剂盒及DNAMarker，购自Takara公司大连分公

7、司；细菌16SrDNA鉴定通用引物，由上海英骏生物技术有限公司广州分公司合成。科玛嘉弧菌显色培养基，购于上海科玛嘉微生物技术有限公司；TCBS培养基，购自广东环凯微生物科技有限公司；弧菌科细菌生化鉴定管，购于浙江天和微生物试剂有限公司；5％兔血琼脂平板，由本试验室自行制备。1．1．3主要仪器PCR仪，BiometraTgPCR；DYY一8C型电泳仪，北京六一仪器厂；SPX一250B—Z型生化培养箱，上海博迅实业有限公司。1．2试验方法1．2．1水体异养菌菌落总数测定采用常规平皿倾注计数法，测定发病池和未发病池内异养菌的菌落总数。培养温度35℃，培养时间48h。1