细胞培养技术中的关键因素.doc

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1、细胞培菲技术中的关键伏I索一细胞操作功夫在手！一、准备工作对升展细胞培养异常虫要，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失敗或无法进行"爪备工作的内容包括器皿的淸洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的饥制、分装及灭菌•无菌室或超挣台的淸沽与洎潯，培养箱及戏他仪器的检杳与调试等.1・清洁、消海、液体宜接接脏细胞的用品要超净处理——无非必须分子直接接触细胞的用品要彻底消除微生物超挣和消得过的样品要绝对密闭保存，标记消得时间实验室保持沽挣，随时涓毒尽量釆用商品化一次性用品操作者也要淸洁和消褂缓冲液要符合生理滲透压(280

2、~310mOsni)和pH(7.2-7.4)2玻璃器皿超挣去污剂煮沸30min(超声波怨荡30min)温水刷洗流水冲洗酸性洗涤液浸泡流水冲洗蒸脩水冲洗纯水漂洗在沽净沿箱中烤于密封消帶3•消寿汗热一股璃器Jill160C.120min湿热(高压，120'C)10〜20磅，20-30min紫外线一气消再剂场而微孔过滤液体0・22um、0.45um二、细胞生长的条件和培养基要求:选择合适的培养基.保证全过程的无菌细胞的营养需要:飙基觀、维生素、碳水化合物、无机离子、蛋白质、促生长因子。其中很多成分系用血清、胚胎浸

3、出液等提供,在很多诸况下还需加入10%的胎牛或新生牛血淸。培养基的制备：a.•浓度要卅一浚透压、b・酸幅度要适宜一酸度计细胞的生存环境：a..温度、b・气相、c・渗透压一一290mmol/L三、实脸者的操作技术细胞操作功夫在手！