实验原理薄层层析.ppt

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1、实验10氨基酸的薄层层析一、目的与要求1.熟悉用层析技术分离不同物质的原理2.掌握薄层层析的基本操作方法二、实验原理薄层层析（thinlayerchromatography,TLC）是将吸附剂（或称固相支持物,如硅胶G、硅藻土、氧化铝、氧化镁、纤维素粉等）均匀地铺在玻璃板上使其成薄层。将待分析的样品点加到薄层板的一端，然后把该端浸入适宜的展层剂（如苯酚-水、正丁醇-冰醋酸-水等）在密闭的层析缸中展层。由于各种氨基酸结构和性质的不同，其在吸附剂表面的吸附能力各异，吸附力大的易被吸附剂吸附，而较难被展层剂所解吸；吸附力小的则易被展层剂携带至较远的距离。这样，氨基酸在吸附剂和展层剂之间反复

2、多次的被吸附与解吸附，使不同的氨基酸得以分离，并通过茚三酮反应显色作鉴别。三、操作部分1.点样取内径约0.5mm管口平整的毛细玻管3支，分别吸取甘氨酸、亮氨酸及混合氨基酸液（含甘氨酸、赖氨酸、亮氨酸），在距薄层板底端2.5cm处、间距1cm宽的位置上轻触点样，点样处干后在原点样处重复点加1～2次。2.展层在层析缸中加入展层剂约1.5cm深，加盖平衡30min。将薄层板点样端浸入展层剂中，加盖密闭展层。当展层剂前沿到达薄层板的2/3高度时，取出薄层板，在玻板背面划下展层剂前沿位置，用电吹风（热风）将薄层板吹干（最好对玻板背面吹）。3.显色用喉头喷雾器向薄层板上均匀喷洒0.5%茚三酮丙酮

3、溶液，热风吹干至各层析斑点显现。原点展层剂前沿亮氨酸展层方向赖氨酸甘氨酸氨基酸薄层层析示意图四、结果与计算●●●●●Rf值=五、注意事项制备的薄层板应厚薄均匀，表面光滑无气泡；点样各原点分布均匀，各点直径不超过2mm；薄层板置层析缸中时各点样原点切勿浸入展层剂中。