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1、细胞膜通透性的测定By何浩明陈少怀原理及应用01原理及应用细胞膜是一种半透膜,具有选择透过性.当细胞内的溶质浓度高于细胞外,外界溶液进入细胞使细胞膜胀破,血红蛋白逸出,发生血融.此时不透明的红细胞悬液突然变成红色透明的血红蛋白溶液.根据溶质透入的速度不同,可测量溶血时间的不同来估计细胞膜对各种物质通透性的大小.实验用品02实验材料10%羊红细胞悬液,兔红细胞悬液或小鼠红细胞悬液,蒸馏水,0.17mol/LNaCl溶液,0.17mol/L氯化铵溶液,0.32mol/L葡萄糖溶液,0.32mol/L甘油,0.8mol/L
2、甲醇溶液,0.8mol/L丙三醇溶液,氯仿,2%TritonX-100液,实验设备试管,试管架,记号笔,滴管,载片,盖片,镊子,滤纸显微镜试剂的配制03试剂的配制1.10%小鼠红细胞悬液取10mL小鼠血加入到90mL生理盐水中混匀,现配现用.2.2%TritonX-100液取2mLTritonX-100液,加M-缓冲液98mL即可.3.M-缓冲液咪唑,3.404g;KCl,3.7g;六水合氯化镁,101.65mg;ECTA,380.35mg;EDTA,29.224mg;巯基乙醇,0.07mL;甘油297mL,蒸馏水,
3、加至1000mL.用1mol/LHCl调pH至7.2,室温保存.实验方案04实验方案1.轻轻振荡一下盛有制备好的羊血红细胞悬液的试管,观察悬液的特点,为一种不透明的红色液体.2.观察红细胞在低渗溶液中的溶血现象在1只试管中加入0.3mL红细胞悬浊液,再加入3mL蒸馏水,轻轻摇匀,注意观察溶液颜色的变化.可见溶液由不透明的红色(隔着它不能看到试管后面纸上的字)变成红色澄清液(此时可以看到纸上的字),即已发生溶血,记录好时间.3.测定红细胞对各种物质的选择通透性取8只试管,分别加入0.17mol/L氯化钠溶液,0.17m
4、ol/L氯化铵溶液,0.32mol/L葡萄糖溶液,0.32mol/L甘油,0.8mol/L甲醇溶液,0.8mol/L丙三醇溶液,氯仿,2%TritonX-100液各3mL,作出标记后,各管均加入红细胞悬液2滴,混匀后静置于室温中.实验结果及分析按下表情况，记录各组溶血情况实验结果与分析1.管内液体分两层:上层浅黄色透明,下层红色不透明,为不溶血.镜下观察时红细胞完好呈凹盘状.2.如果试管内液体浑浊,上层带红色者,即不完全溶血,镜下观察时有部分红细胞碎片状.3.如果试管内液体变红且透明即完全溶血,镜下观察发现细胞全部呈
5、现碎片状.谢谢观看
