SNT 1145-2002 植物检疫 苜蓿黄萎病菌检疫鉴定方法.pdf

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1、SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1145一2002植物检疫首蓓黄萎病菌检疫鉴定方法Plantquarantine-Methodsforinspectionandidentificationofalfalfawilt(Verticilliumalbo-atrumReinke&Berthold)2002一11一25发布2003一05一01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局SN/T1145-2002前言本标准在制定过程中，经过调查研究、分析有关资料，根据首楷黄萎病菌的生物学特性、病理学原理

2、确定各项技术指标。本标准给出了首蓓黄萎病菌的症状特征、病原菌形态学特征以及致病性测定，三者需结合起来作为鉴定依据。本标准的附录A、附录B为资料性附录.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国深圳出人境检验检疫局.本标准主要起草人:章桂明、王颖、王伍、黄佩卿、程颖慧。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。SN/T1145-2002植物检疫首蓓黄萎病菌检疫鉴定方法范围本标准规定了植物检疫中首猎黄萎病菌的检疫和鉴定方法。本标准适用于首fft，包括首箱种子、首楷种苗以及首糟黄萎病菌其他

3、寄主中首楷黄萎病菌的检疫和鉴定方法。术语和定义下列术语和定义适用于本标准。轮状分生抱子梗verticillateconidiaphora轮枝菌的分生抱子梗类型，在直立的分生抱子梗每节基部膨大处轮生若干个小梗，可以有1轮~5轮。2.2厚垣抱子chlamydospore由菌丝个别细胞膨大形成，具有厚壁和浓缩的原生质，可抵抗高温、低温、干旱、营养短缺等不良的环境条件的一种休眠抱子。2.3微菌核microsclerotium暗褐色或黑色近球形坚硬的休眠体，是单一菌丝体不断芽殖聚集而来。2.4休眠菌丝体restingmy

4、celium休眠体，呈暗褐色或黑色，分隔规则，隔膜间膨大，呈念珠状。原理首楷黄萎病菌(Verticilliumalbo-atrumreinke&berthold)是首楷上的一种危险性有害生物。首稽黄萎病菌属真菌界(Fungi)，半知菌亚门(Deuteromycotina)，丝抱纲(Hyphomycetes)，丝抱目(Hy-phomycetales),丛梗抱料(Moniliaceae)，轮枝抱属(Verticillium)。该病菌的为害症状、形态学特征与其他病原菌(包括其他轮枝菌)不同，是鉴定该病菌的依据。仪器设

5、备4.1仪器4.1.1实体显微镜4.1.2生物显微镜4.1.3电子分析天平(感量1八0000)4.1.4普通天平(感量1八00)SNIT1145-20024.1.5超净工作台4.1.6生化培养箱4.1.7光照培养箱4.1.8高压灭菌锅4.2实验用典4.2.1培养皿、塑料培养皿(9cm)4.2.2三角瓶(250mL)4.2.3试管(12mm)4.2.4烧杯(100mL,1000mL)4.2.5手术刀4.2.6手术剪4.2.7镊子4.2.8载玻片(25.3mmX76.2mm)4.2.9盖玻片(18mmX18mm)4

6、.2.10量筒(500mL)4.2.11吸管4.2,12酒精灯4.2、3滤纸4.2.14pH计4.2.15塑料袋已J药品二气J..梅干煎汁‘，J一酵母浸膏‘，口︺…乳糖找月︺﹃葡萄糖﹄﹃5︸琼脂八0取样与现场检查6.1首蓓种子的取样按以下要求随机取样带回实验室检验:1.5kg-10kg取1份;11kg-100kg取2份;101kg-500kg取3份;501kg-1000kg取4份。每份样品的重量为1.5kg,1.5kg以下全部取样。6.2首荷种苗、植株的取样按以下标准随机取样:50株以下取1份;51株一20。株

7、取2份;201株~1000株取3份;1001株一5000株取4份;5001株以上每增加5000株增取1份，不足5000株的余量计取1份样品海份样品5株。6.3现场检查首稽种子取样时往意检查种子中有无可疑带病种子、首稽残体;植株取样时注意检查有无可疑病株。若有可疑病株应将其挑出来，并送实验室做进一步检验鉴定。制样按6.1的要求抽取的每份样品应充分混匀，制成平均样品，从每份平均样品中取25g作为检验样品。SN/T1145-20028实脸室检验B.1种子检验8.1.1吸水纸培养8.1.1.1吸水纸培养皿的准备用。.2

8、%的2,4-D钠盐溶液浸演无菌吸水纸，然后将吸水纸(滤纸)铺在直径为9cm的已灭菌的培养皿底部。每皿铺3层。8.1.1.2样品种子的放it将抽取的检验样品不经表面消毒直接放里于培养皿中，每皿均匀放置25粒种子。8.1.1.3培养将培养皿置于21'C-23℃条件下培养，每昼夜用黑光灯照明12h，培养10d,8.1.1.4镜检10d后取出培养皿，用体视显微镜逐粒检查种子，根据菌落特征，主要