sirna产品使用说明

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1、药物临床研究：RNAi已经成为目前基因功能研究、药靶发现、药物开发的重要方法，针对多种疾病的RNAi药物已经相继进入临床试验阶段，初步统计大约有19个公司正在开发85种siRNA药物，主要集中在眼部、肿瘤、抗病毒、肾病、心血管、呼吸siRNA产品使用说明RN：R10043.3道、糖尿病等方面（表4）。锐博生物拥有大规模GMP核酸生产车间，配备了AKTAOligoPilot100，OligoPilot400核酸合成仪，能够满足百克级核酸药物临床研究合成需求，采用AKTAExplorer100纯化系统保证核酸纯化质量，应用戴安U3000钛系统高效液相色产品简介谱，离子色谱及反相色谱，Beckman

2、毛细管电泳检测仪等多种手段进行核酸纯度鉴定，能够为您的药物临床研究提供有常规化学合成siRNA为21~25nt的双链小分子RNA，即用型。力保障。表４部分RNAi药物研发进展运输保存疾病药物名称用药方法靶基因试验阶段产品以冻干粉的形式，常温运输。收到产品后，请于-20℃~-80℃保存，冻干粉可以稳定保存一年。使用前瞬时离心，用RNase-freeH2O或灭菌ddH2O配制成20μM储存液，分装保存，避免反复冻融（不超过5次）。bevasiranibsodiumsiRNAVEGF临床Ⅲ期表120μM储存液的配置参考PF-655siRNAVEGF临床Ⅱ期siRNA(nmol)0.250.51252

3、0眼湿型老年黄斑病变溶解体积(μl)12.525501002501000部(AMD)PF-4523655siRNAVEGF临床Ⅱ期注：如需进行高通量筛选试验，可选择siRNALibrary。疾病使用前须知AGN-211745siRNAVEGFR1临床Ⅱ期为避免外界因素（包括酶，极端pH或者温度条件等）导致产品降解，所有操作请严格遵循RNA操作规则。实验过眼部神经病变程中，产品最好于冰上放置，使用完毕后请于-20℃~-80℃小心保存。QPI-1007siRNACaspase2临床Ⅰ期(Ocularneuroprotection)肝癌细胞实验方法：ALN-VSPsiRNAKSP,VEGF临床Ⅰ期(

4、Hepaticcancer)为了降低细胞密度、试剂用量，转染效率等因素导致的孔间差异，保证实验的可靠性和可重复性，一般建议：肿瘤CALAA-01siRNARRM2临床Ⅰ期1）转染实验中每个转染样品至少设置3个复孔；肿(Tumor)2）接种细胞时，每孔接种的细胞数量尽量保持一致，且细胞均匀分布。瘤实性瘤TKM-PLK1siRNAPLK1临床Ⅰ期(SolidTumourCancer)1.转染浓度：实性瘤Atu027siRNAPKN3临床Ⅰ期siRNA产品最佳工作浓度因不同的细胞类型及研究目的而异。锐博生物推荐的siRNA初始转染浓度为50nM，转染后(SolidCancer)检测时间为24~72h

5、。最佳转染效率一般通过设置时间曲线和浓度梯度进行优化，优化的范围建议为5~100nM。呼吸综合症ALN-RSV01siRNANgene临床ⅡB期病(RSV)2.转染步骤：毒伊波拉病毒感染以riboFECTTMCPReagent转染siRNA于24孔板，转染浓度为50nM为例，其他规格容器转染请参考表2。TKM-EbolasiRNAEbolavirus临床Ⅰ期感(EbolaVirus)染1）接种细胞乙型肝炎NUC-B100siRNAHBV临床Ⅰ期5(HepatitisB)a.贴壁细胞：转染前一天，接种1×10细胞至含有500μl完全培养基的24孔板培养孔中，使转染时的细胞密度能够达到50~80%

6、。急性肾损伤QPI-1002siRNAp53临床Ⅱ期注：1）不同细胞生长速度不同，接种细胞的数量需要依据经验而定；2）每孔接种的细胞数量尽量相同，使细胞均匀分布于培养基表面。(AcuteKidneyInjury)b.悬浮细胞：肾淀粉样变肾病ALN-TTR01siRNATTR临床Ⅰ期接种1×105~5×105个细胞至含有500μl完全培养基的24孔板。病(Amyloidosis)先天性厚甲症2）转染步骤TD101siRNAMutantK6a临床ⅠB期(PachyonychiaCongenita)对于每个转染样品，请按以下步骤准备：TM注：以上信息收集于2012年12月。如需更详尽资料，请联系su

7、pport@ribobio.com。a.稀释siRNA：用50μl1XriboFECTCPBuffer（v1）稀释1.25μl20μMsiRNA储存液（v2），轻轻混匀，室温孵动物实验方法：育5min。etal.YichaoWu,Gonzalez-GonzalezE,etal.YuanH,etal.Rosas-T,etal.TompkinsSM,ZimmermannTS,SoutschekJ,et