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1、小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验08级生物技术一班学号：扌商要：巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分了免疫学的重要对彖。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2-3周，多用做原代培养，难以长期生存。关键词：小鼠；巨噬细胞；吞噬实验；引言：1.巨噬细胞简介：人类的吞噬细胞有大、小两种。小吞噬细胞是外周血屮的屮性粒细胞。大吞噬细胞是血屮的单核细胞和多种器官、纟R织屮的巨噬细胞，两者构成单核吞噬细胞系统。吞噬细胞作用将抗原决定簇暴露出来，是效应T细胞利用水解酶摧毁侵入病原体巨噬细胞：单核吞噬细胞系统屮高度分化、成熟的细

2、胞类型。由血液屮单核细胞迁入组织麻分化而成，在不同器官、组织屮有不同类型和命名，其表达Fc受体、C3b受体和CD14,在I古I有免疫屮发挥防御功能，也是参与适应性免疫的专职抗原提呈细胞。单核吞噬细胞系统屮高度分化、成熟的长寿命的细胞类型。具有较强的吞噬功能。刺激巨噬细胞做它该做的清道夫工作，即可清除老鼠大脑屮的脑斑。脑斑是蛋白质的堆积物，是老年失智症的病征Z-o巨噬细胞是扮演清道夫角色的免疫细胞，巨噬细胞屮的合成物转型生长因了B（TGF-beta）,具有抑制巨噬细胞活动的功能，以免产生失控反应。老年失智症的大脑，均有转型生长因了B浓度升高的现彖。科学家认为转型生长因了B浓度偏

3、高，是因老年失智症的脑斑会引起发炎，而转型生长因了B增加，是为减轻发炎，但新的实验结果显示，情况并非如此。科学家以基因改造的方式，让老鼠的转型生长因子B,无法对在外周循环屮的巨噬细胞发出讯号。科学家发现，如此做示，外周循环的巨噬细胞会大举进入老年失智症老鼠的大脑屮。康乃狄克州耶鲁大学医学院陶恩说，外周循坏巨噬细胞渗透大脑的动作，即是老年失智症老鼠的疗方。这项结果大出陶恩意料。之前科学家的论点是，提高人脑的免疫反应可能加重发炎，因而对病情有害。实验屮，基改老鼠的脑斑有九成消失无踪，而且老鼠的官能反应也获得改善，例如走迷宫不再那么容易迷失方向。陶恩说,若科学家能以药物，封阻人体外

4、周循环屮的转型生长因了B,应该也能达到动员外周巨噬细胞进入大脑，清除老人斑的目的。陶恩的研究团队已将研究重心，改为寻找可封阻转熨生长因了B的药物。2.巨噬细胞的培养方法：巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来白小鼠，如P338D1.S774A.1.RAW309Cr.l等，均获恶性，培养屮呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难以建株。培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞，以小鼠腹腔取材法最为实用，其法如下：（1）实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫瓮乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。（2）引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精屮3〜5秒。（3）置动物于解剖台上，

5、用针头間定四肢，双手持银撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。（4）再用70%酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。（5）用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔屮液体集于针头下吸取入针管内。（6）小心拔岀针头，把液体注入离心管屮，250g4°C离心10分钟，去上清，加10mlEagle培养基。（7）计数细胞,每只小鼠可产生20-30x105细胞，其屮90%为巨噬细胞。（8）为获取3x105帖附细胞/平方厘米，需接种2.5x106/mL（9）为纯化培养细胞，去除其它白细胞，接种数小时后，去

6、除培养液，用Eagle液冲洗2次后，再加新Eagle培养液置37VCO2温箱中培养。1.巨噬细胞的培养坏境：细胞培养是无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因索的影响。细胞培养室和设计原则是防上微生物污染和有害因索影响，要求工作环境清洁，空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。2.抑制因子：巨噬细胞游走抑制因T（macrophagemigrationinhibitoryfhctor,MIF）是集细胞因了、生长因了、激素和酶特性于一身的多效能蛋白分了。MIFM度

7、保守，在多种急慢性炎症性疾病屮发挥多种巨噬细胞免疫功能。MIF参与动脉粥样硬化发病和发展,即斑块形成、动脉损伤后重建、动脉瘤形成、心肌梗死、缺血再灌注损伤等机制。此外，其他形式的心肌功能不全和炎症与MIF参与血管再生有关。从特征和功能方面，MIF显著不同于其他细胞因了，是提高动脉粥样硬化治疗的最主要的靶向。利用MIF,作为心血管疾病治疗靶向和诊断标志物。第四军医大学西京医院呼吸内科、西安市中心医院和陕讥i省绥徳县医院的研究人员共同完成的研究发现，白藜芦醉可以抑制肺泡巨噬细胞过度释放肿瘤坏死因了（TNF・