三七三醇皂苷对慢性脑缺血大鼠脑源性神经营养因子表达及认知功能的影响

《三七三醇皂苷对慢性脑缺血大鼠脑源性神经营养因子表达及认知功能的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、·436·血管病杂志2010年8月18日第7卷第8期ChinJCerebmvascDis．Au18．2010．V01．7．No．8·论著摘要·三七三醇皂苷对慢性脑缺血大鼠脑源性神经营养因子表达及认知功能的影响顾勤姜嘟嘟肖俊杰单圣道詹青赵江民关键词：脑缺血；认知障碍；脑源性神经营养因子；大鼠；三七三醇皂苷doi：10．3969／j．issn．1672—5921．2010．08．O11慢性脑缺血是神经系统的一种常见的病理状态，是血管皂苷用无水乙醇溶解，然后以100mg／次，灌胃，2次／d。模型性痴呆、Alzhei

2、mer病(AD)和Binswanger病等多种疾病发展组和假手术组分别灌以等量的等渗盐水，6周后作各项指标过程中的一个共同病因。早期以认知功能损害为主要表现，的检测。最终导致持久或进展性认知与神经功能障碍⋯。脑源性神1．4认知功能的检测经营养因子(brain—derivedneurotrophicfactors，BDNF)是维持术后第6周用Y型迷宫实验测试认知功能，以达到连续神经元功能和再生修复及防止神经元退行性变的重要细胞10次测试中至少有9次正确反应(正确反应率i>90％)时所因子。脑缺血可导致BDNF的

3、广泛表达，且其mRNA表达需的电击次数表示。术前预测试1次，剔除灵活性过差的大水平与局部神经元抵抗损伤的能力呈正相关J。三七三醇鼠。电击次数越高表示认知功能越差。皂苷是从我国传统中药三七中提取出的有效成分，其可以透1．5实时荧光PCR检测过血一脑屏障，使脑内蛋白质合成显著增加j，具有改善微循1．5．1样本准备：脱臼法处死大鼠后立即断头取出海马组环及抗炎等作用，在急性脑缺血治疗中显示出其良好的应用织，用RNAlater液浸泡在EP管中，保存在液氮中。前景。但是三七三醇皂苷是否可以改善BDNFmRNA的表1．5．

4、2引物设计：按照实时荧光定量技术对引物的要求，用达，改善慢性脑缺血所致的认知功能障碍尚不得而知，故本BeaconDesigner7．0进行引物设计的筛选，BDNF上游引物序研究对此进行了初步探讨。列的5一CTGGAGAAAGTCCCGGTAT．3．，下游引物序列的5．1材料与方法GGTAG1TrcGGcArITI1GcGAGT一3；内参B—actin上游引物序列1．1动物及分组的5一GTrGACATCCGTAAAGACC．3．，下游引物序列的5．TG．选用清洁级11—12月龄的Wistar大鼠36只(购自上海

5、GAAGGTGGACAGTGAG-3-，由上海生物工程公司合成。斯科特动物实验中心)，雌雄各半，体质量300～400g，随机1．5．3RNA的抽提：从液氮中的EP管中取出海马组织，加分为假手术组、慢性脑缺血组(模型组)、慢性脑缺血+三七入含有1ml预冷Trizol提取液的EP管中，摇匀静置10min，三醇皂苷组(治疗组)，每组l2只。加200l氯仿混匀、离心(12000g，4qC，15min)取上清，加入1．2主要药品与设备等体积异丙醇沉淀，75％乙醇洗涤2～3次，2O～50IxlDEPC三七三醇皂苷(三七通

6、舒胶囊，由成都华神集团股份有水溶解。RNA纯度和浓度用OD260／OD280来检测。限公司制药厂提供，批号：Z20030109)，每粒含三七三醇皂苷1．5．4cDNA合成：严格按照逆转录试剂盒说明书进行，逆100mg；PrimeScriptTMRT试剂盒和SYBRPremixExTaqTM转录反应液：5×PrimerSeriptTMBuffer2l；PrimerSeriptTM试剂盒，由宝生物工程有限公司提供。Y型迷宫(张家港生RTEnzymeMix10．5l；OligodTPrimer(50mmol／L)物

7、医学仪器厂)。0．5l；Random6mers(100mmolfL)0．5Ixl；总RNA1O0～1．3模型的制作200ng；补充无核酶水至1OIxl；反应液配制均在冰上进行。参照Bennett等制作慢性脑缺血大鼠模型的方法，将逆转录反应条件：37℃、15min；85℃、5s。大鼠麻醉后颈正中切开皮肤，钝性分离双侧颈总动脉，每侧1．5．5实时荧光PCR的检测：严格按照SYBRPremixEx用0号手术线分别结扎近、远心端后，从中间剪断。假手术TaqTM试剂盒说明操作，PCR反应液：SYBRPremixEx组，

8、只分离不结扎。治疗组，于术后3周开始，先将三七三醇TaqTM(2×)12．5Ixl；PCR引物(10txM)0．5；cDNA溶液5l(总量在10ng左右)；无核酶水7l。反应液配制均在冰上进行。实时荧光PCR反应条件为：95℃变性、1min，然后作者位：200065上海，忙司济大学附属同济医院神经内科(顾勤、95~C、30S，55~C、1min，72℃、30S，共45个循环。扩增完成后姜嘟嘟、詹青)