elisa检测过程影响因素及操作注意事项

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1、2014筇(第35卷)第1期鸯需牲兽蓬测迪谨影卿爱掇律事常磊’，孙娅莉，王伟杰。，程朝亮(1．郑州市兽药饲料监察所，河南郑州450052；2．郑州市动物卫生监督所；3．洛阳市动物疫病预防控制中心；4-1匣师市动物疫病预防控制中心)中图分类号：$852．45文献标识码：B文章编号：1004—5090201401—0046—02酶联免疫吸附法(ELISA)是将已知的抗原或抗体结2试剂准备合在固相载体上，然后加入待测样本和酶标记的抗体或抗原，使其与预先包被在固相载体上的抗原或抗体发生特异目前市场上针对ELISA检测的试剂盒名目繁多，种类性

2、反应，用洗液洗去多余的游离成分和干扰物质后滴加底繁杂，质量参差不齐，试验开始前应选择正规厂家生产的物溶液使目标产物出现颜色反应，并最终通过测定产物的合格产品。另外，同一种试剂不同批次的产品在制作过程吸光度值进行定量分析。它是在免疫酶技术的基础上发中很难保证质量完全一致，为避免结果差异，应尽量选择展起来的一种新型免疫测定技术，兼具抗原抗体反应的特同一批次的试剂对样本进行检测。异性和酶催化的高效性，具有灵敏性、特异性高，重复性试剂盒应在有效期内使用，尽量做到随用随买，一般好，检测速度快及适宜大批量检测等优点，成为目前应用储存时间越长，试

3、剂盒吸光度值越低。试剂使用前应平衡最为广泛的酶免疫测定技术。被广泛应用于临床医学、环至室温，否则往往会降低灵敏度，影响检测下限。回温时境污染控制、食品质量安全监测、动物疫病诊断及畜产品可将试剂盒打开，使各试剂瓶完全接触室温以保证充分回药物残留等领域。ELISA检测操作简单，但人为因素对实温，并避免太阳光直射。验结果影响较大。样本、试剂、加样、洗板等过程都会对结3加样果造成一定的影响。加样准确与否是影响试验结果的常见和主要因素之1标本的采集和处理一，为减少误差，ELISA检测过程使用微量移液器加样，速度可用作EL1SA检测的标本非常广

4、泛，包括饲料、食品、不可过快，过快无法保证加样的准确性和均一性。要避免体液、排泄物以及分泌物等等。有些可直接用于检测，有加在孔壁上部，加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异性些则需要一定的前期处理过程，最终用于检测的样本必须吸附，出现假阳性结果。不可溅出和产生气泡，溅出会对邻是液体状态。ELISA检测对样本的要求一般包括两点，新近孔产生污染，出现气泡则反应液界面有差异。试剂、样本鲜和纯净。样本新鲜是保证检测结果真实可靠的前提条使用前上下颠倒混匀数次，垂直加入微孔板中，布板时做标件，ELISA检测过程最好在样本新鲜时及时进行。血清样准品

5、、空白、阴阳性对照、样本双孔对照，以确定结果准确性。本放置时间过长，有可能产生细菌污染，而细菌菌体中可在加样准确、规范的同时，尽量缩短加样时问，保持各能含有内源性辣根过氧化物酶(rmP)，造成结果假阳性现孔反应时间一致，不仅有利于提高样本检测重复性，并可象；而在疫病诊断中血清放置时间过长可能会导致被测抗有效避免假阳性结果的出现。体效价降低，导致出现假阴性结果。如不能及时检测，应ELISA检测板孔底包被有抗原或抗体，吸头应避免刮将样本冷藏或冷冻放置，并且尽量避免反复冻融。反复冻擦包被板内底壁，并要始终保持板孔外底面的清洁，以利融产生的

6、机械剪切力会对标本中的蛋白等分子产生破坏于酶标仪垂直光线检测。加完样后可轻轻震摇整板，使反作用，引起假阴性结果。一般来说，对收集后5d内进行检应液混匀。测的标本，可储存在4℃备用，如因特殊原因需要周期收3温育集样本或因故推延检测的，可将样本及时分装后于一20℃或一70℃条件下保存。不同的检测样本有不同的保质期ELISA检测中抗原、抗体反应的完成需要一定的温度限，尽量要求在保质期内完成检测。和时间，这一保温过程称为温育。不同的试剂盒采取的温另外，标本要做到纯净无杂质，杂质会对实验造成一育温度可能会有差异，有43℃、37℃、室温和4℃等

7、，温育定的干扰，产生非特异性反应，使检测结果不准，可离心沉所需时间一般与温度成反比，即温度越高，则所需时间相淀后取上清液检测。冷藏或冷冻的样本检测时需回温至对较短。其中37℃和室温较为常用，温度过高、温育时间室温短对弱阳性样本有漏检的可能，温度过低则反应时间较广告信箱hnxmsygq@t63，com河南诸美种猪育种集团：专注育种，用心服务，造福社会熏南鏖囊2Oi4馨(齄35港)麓1鳎鸡种常翳痢蚴渝对策何国秀(渑池县动物疫病预防控制中心，河南渑池472400)中图分类号：$858．31文献标识码：B文章编号：1004—50902014

8、01—0047—02近两年鸡的肝病发病率较高，成为危害养殖业的病类剩又运动不足，饲料被黄曲霉毒素污染，引起鸡群慢性中之一。能引起鸡肝病的原因有很多，有营养性因素、疾病毒等都会导致该病发生，又称鸡的脂肪肝。该病多发生于因素、寄生虫因素、