ema与pcr结合检测沙门氏菌方法的研究

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1、畜牧与饲料科学AnimalHusbandryandFeedScienceEMA与PCR结合检测沙门氏菌方法的研究赵瑜，李金磊，董鹏，狄元冉，高延玲(1．河南省驻马店市畜产品质量监测检验中心，河南驻马店463000；2．河南省畜产品质量监测检验中心，河南郑州450000)摘要：为了建立一种快速区分样品中沙门氏菌的死细茵与活细菌的检测方法，将叠氮溴化乙锭(EMA)与PCR技术相结合。以沙门氏茵的nvA为靶基因．以沙门氏茵的纯培养细胞做模板进行扩增。并进行灵敏度、特异性、曝光时间及EMA浓度试验。结果显示，灵敏度为14CFU／mL，最佳曝光时间为2min，3"-E

2、MA的浓度小于18p~g／mL时。EMA对活茵靶基因的扩增没有明显的抑制，而终浓度为1p~g／mL的EMA，能有效抑制1xl0CFU／mL沙门氏茵死菌的扩增。EMA—PCR能有效降低沙门氏茵检测过程中的假阳性。关键词：沙门氏菌；EMA—PCR；检测；死菌与活菌中图分类号：$855．12；R155．5文献标识码：A文章顺序编号：1672—5190(2013)11—0l13一O3ResearchonDetectionofSalmonellaCombiningEMAandPCRZHAOYu，LIJin-lei，DONGPeng2，DIYuan—ran2,GAOYa

3、n-ling2(1．ZhumadianAnimalProductsQualityMonitorTestCenterofHenanProvince，ZhumadianProductsQualityMonitorTestCenter，Zhengzhou450000，China)Abstract：InordertoestablishafastdetectionmethodfordistinguishingdeadbacteriaandlivebacteriaofSalmonellafromsamples，EMAandPCRwerecombined，meanwhil

4、einvAgeneofSalmonellawastakenastargetgene，andthenamplificationwascarriedoutbytakingpureculturecellsofSalmonellaastemplate，furthermoresensitivity，specificity，exposuretimeandEMAconcentrationtestwerecarriedout．Resuhsshowedthat：thesensitivitywas14CFU／mL；theoptimalexposuretimewas2min；wh

5、entheconcentrationofEMAwaslessthan18g／mL。EMAhadnoobviousinhibitiontotheamplificationoflivebacteriatargetgene，whileEMAatfinalconcentrationof1g．／lnLcouldeffectivelyinhibittheamplificationofdeadbacteriaatlxlOCFu，mL．S0EMA—PCRcouldeffeetivelydecreasefalsepositiverateinthedetectionofSolm

6、onella．Keywords：Salmonella；EMA—PCR；detection；deadbacteriaandlivebacteria沙门氏菌是一种革兰氏阴性病原菌，也是一种常氏菌、福氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌、金黄色葡萄球见的重要人畜共患病原菌．它不仅可以引起胃肠炎，菌、大肠杆菌25922、枯草芽胞杆菌、ETEC、EPEC、单还会引起伤寒、败血症及肠外灶性感染和食物中毒等增李斯特氏菌、阴沟肠杆菌、阪崎肠杆菌。上述菌株均多种症候群]。沙门氏菌血清型众多，已确认的血清购自中国兽医微生物菌种保存管理中心。型有2500个以上_2]。2007年发生的“花生酱

7、事件”以1．1．2试剂：叠氮溴化乙锭(EMA)、TaqPCRMaster及2o08年发生的“西红柿事件”，引起了世界各国对Mix及DNA小量提取试剂盒购自上海莱枫生物科技沙门氏菌的普遍关注l3]。沙门氏菌是人和动物的主要有限公司：相关培养基购自北京陆桥技术有限责任公致病菌之一[4]，人类的大部分沙门氏菌感染是通过受司．琼脂糖、DL2000DNAMarker购自TaKaRa公司。污染的肉和乳制品传播的_5]。美国每年有140万人感1-1-3主要仪器：梯度PCR仪(SENSO)、台式高速冷染细菌性肠胃炎，其中有30％是由沙门氏菌污染引起冻离心机(Sigma)、电

8、泳仪(GE)、凝胶电泳成像分析系食物中毒导致的。沙门