嗜酸乳杆菌对斑马鱼子代幼鱼免疫功能的影响-论文.pdf

《嗜酸乳杆菌对斑马鱼子代幼鱼免疫功能的影响-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、嗜酸乳杆菌对斑马鱼子代幼鱼免疫功能的影响张羽，盛洁，李青，余强。，邓扬，卿素珠h，何夙旭(1．西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100；2．中国农业科学院饲料研究所，北京100081)摘要：以嗜酸乳酸杆菌JCM1132作为益生茵添加剂饲喂亲代斑马鱼，研究其对子代幼鱼免疫功能的影响。试验设对照组(饲喂基础饲料)和益生茵组(基础饲料中添加10cfu／g嗜酸乳酸杆茵JCM1132)，饲喂30d后，对其孵化的幼鱼进行嗜水气单胞茵攻毒，分别检测攻毒后幼鱼死亡情况及攻毒期间鱼体内免疫因子illb和biaamRNA相对表达量。结果表明，在攻毒后

2、5d到8d，益生茵组的幼鱼死亡率显著高于对照组(P<0．05)；在攻毒后5h、24h和48h，益生菌组幼鱼的illb和nfkbiaa转录显著低于对照组(P<0．05)。表明嗜酸乳酸杆菌饲喂斑马鱼亲鱼并不能提高子代斑马鱼的免疫功能。关键词：益生茵；嗜酸乳酸杆菌；斑马鱼；子代；免疫中图分类号：$852．651；Q786文献标识码：A文章编号：1007—5038(2013)11—0077-04益生菌(probiotic)一词，来源于希腊语pro和变化，研究该益生菌对斑马鱼子代幼鱼免疫功能的bios，意思是对生命有益的n]。现在普遍采用的定影响，

3、为其在水产养殖业上的应用提供依据。义为“一种活的微生物，在摄入合适的剂量时，对宿l材料与方法主的健康可以产生有益作用”。研究表明，益生菌对1．1材料宿主具有多方面的作用，包括调节肠道(GIT)功能、1．1．1实验动物Tu系斑马鱼由北京大学发育生抑制病原菌、促进免疫系统的发育，为宿主提供营养物学实验中心惠赠，6月龄，平均体重0．2g，共2O等引。尾(雌：雄比例为1：1)。斑马鱼进入实验室后，先乳酸菌是一种重要的益生菌类群，目前已有多在鱼房自动循环水系统中驯养2周。斑马鱼养殖条种乳酸菌获得相关部门的鉴定并被批准应用于生产件为28℃，14h光照

4、周期，每天上午1O：OO和下午实践。欧洲食品安全委员会已批准了8种乳酸杆菌16：O0喂食至表观饱食。(嗜酸乳酸杆菌，保加利亚乳杆菌，干酪乳杆菌，香肠1．1．2试验用菌株嗜酸乳酸杆菌JCM1132(乳杆菌，干酪瑞士乳杆菌，乳酸乳杆菌，植物乳酸杆L．acidophilusJCM1132)与嗜水气单胞菌NJ一1菌，鼠李糖乳酸杆菌)可以作为动物饲料添加剂使(AeromonashydrophilaNJ-1)均为中国农业科学用。相关研究已经证实，乳酸菌具有维护亲鱼机体院饲料所水产研究实验室保存。乳酸杆菌以MRS肠道平衡、提高机体免疫功能以及促进生长发

5、育等培养基，37℃，厌氧培养。嗜水气单胞菌以LB培养的功能。而有关给亲鱼饲喂乳酸菌后对其后代生长发育影响的研究则报道不多，且结果不一，如基，37℃，摇床培养。WangZ等[6的研究证实母代斑马鱼体内补体成分1．1．2引物免疫因子基因illb和nfkbiaa的引物含量的上升会提高对应子代斑马鱼的抵抗力；另有参考文献[9—11]，其序列分别为illb—f：5一ATC—研究则表明，在斑马鱼繁殖期，一些致病菌的刺激会CAAACGGATACGACCAG一3，illb—r：5一TCGGT—提高其子代斑马鱼的抵抗力，而乳酸杆菌的添加并GTCTTTCCT

6、GTCCAT一3；nfkbiaa—f：5一GGACG—没有促使宿主体内免疫球蛋白的升高[7_8]。本研究GAGACACGTATCTGC一3，nfkbiaa—r：5一AC—以模式动物斑马鱼为试验对象，以嗜酸乳酸杆菌CATTTGTGGCTGTTCTGTGAC一3；内参基因序JCM1132为益生菌株饲喂斑马鱼亲鱼，通过检测嗜列：rplll3-f：5，_TCTGGAGGACTGTAAGAGG—酸乳酸杆菌饲喂后其子代幼鱼对嗜水气单胞菌的抵TATGC一3；rpl113一r：5一TCAGACGCACAATCT—抗能力及体内免疫因子基因illb和nfkb

7、iaa的转录TGAGAGCAG一3。引物由上海英俊生物技术有限收稿日期：2013～05—21基金项目：国家自然科学基金项目(31272672)作者简介：张羽(1987一)，男，河南新乡人，硕士研究生，主要从事发育生物学相关研究。*通讯作者78动物医学进展2013年第34卷第1l期(总第245期)公司合成。1．2．4幼鱼RNA的提取及cDNA的合成在攻1．1．3主要试剂及仪器Trizol裂解液、cDNA反毒前(0h)，攻毒后1、5、24、48h分别取幼鱼(全转录试剂盒和SYBRGreenMix荧光定量试剂盒均鱼)，按照Trizol裂解液说明

8、书提取幼鱼的RNA，经为北京天根生物生化科技公司产品。高速冷冻离心过12g／I琼脂糖凝胶电泳和核酸定量仪检测RNA机(Z383K，Hermle)，荧光定量PCR仪(IQ5，Bio—质量和浓度。