从蛋清浓厚蛋白中提取溶菌酶技术

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1、固应Yin用gy推ong广Tuigtiang栏目主持人：郭文华溶菌酶在酶学研究中具有重要意义，但是在我力测定采用比浊法。③溶菌酶含量的测定。溶菌酶国目前还缺乏适合工业化生产高品质溶菌酶的可行于波长281nm处有最大吸收峰，当溶菌酶浓度处工艺。目前，直接结晶法、超滤法、离子交换树脂于一定范围时，其吸光度与浓度具有良好的线性关吸附法、亲和层析法等常被用来提取溶菌酶。超滤系。以浓度0．2mol／L磷酸盐缓冲液(pH值6．2)法是利用控制超滤膜孔径大小来过滤杂质，水和小作为空白溶液，测定样品液波长281

2、nm处的吸光分子物质可以通过，从而获取产物。亲和层析法是根据作用酶与底物有特异亲和力的特性，利用酶分子独有的专一性结合位点或结构性质的分离方法，具有较高的选择性，是目前生产高活性、高纯度溶菌酶的分离纯化方法。将超滤法与亲和层析法从蛋清浓厚蛋白中提取溶菌酶技术口金茜宋关娜仝其根相结合对鸡蛋清溶菌酶进行提取的532艺，应用于大度，通过标准曲线回归方程得到溶菌酶的含量。由规模的工业化生产中，可提高生产效益，从而促进于试验中蛋清液以pH值6．2、浓度0．2mol／L的磷我国溶菌酶产业的快速发展。酸盐缓冲

3、液为稀释介质溶液，故将GB／T258791．原料设备—2010中“溶菌酶标准品与蛋清液均以0．9％的氯鲜鸡蛋，购买于农贸市场；溶菌酶标准品、牛化钠溶液为介质溶液”改为“均以浓度0．2mol／L血清白蛋白，北京奥博星生物技术有限责任公司提磷酸盐缓冲液(pI-I值6．2)为稀释介质溶液”，并供；溶壁微球菌，中国科学院微生物研究所提供；作为空白液使用。壳聚糖，国药集团化学试剂公司提供；冰醋酸、碳3．32艺优化酸氢钠、磷酸氢二钠、盐酸等均为分析纯，北京化(1)超滤工艺条件的优化蛋清溶菌酶是小分工厂提供。

4、子物质，相对分子量约为14300，而蛋清中其他蛋UEIES一503型中空纤维柱、UEOS一503型中空白质的分子量几乎都在30000以上，因此需要采纤维柱、Tu一1810型紫外可见分光光度计、99—1A用20000Da的中空纤维柱对样品进行过滤。根据型磁力搅拌器、GENESIS25型真空冷冻干燥机。单因素试验结果，选取料液pH值、温度、进样压2．实验方法力等3个主要影响因素的偏小和偏大水平做3因素(1)超滤料液的前处理方法①浓厚蛋白预处3水平k(33正交试验，确定最佳的溶菌酶超滤提理。用蛋黄分离

5、器将蛋清、蛋黄分离。利用20目取工艺条件。筛对蛋清进行过滤，滤过蛋清为稀薄蛋白，未滤过(2)超滤工艺检测指标以溶菌酶酶活得率、蛋清为浓厚蛋白，将浓厚蛋白作为试验原料，浓厚溶菌酶透过率和蛋白清除率作为参考指标，以确定蛋白含量占全部蛋白的50％～60％。将分离得到的最佳的超滤工艺条件。浓厚蛋白置于常温下进行磁力搅拌，以降低蛋清黏(3)验证试验通过以上试验，确定了最佳的度，搅拌过程不应起泡，以防止蛋白变性。②料液超滤稀释方式、稀释倍数及工艺条件。采用最佳的前处理。将预处理好的浓厚蛋白以pH值为6．2、

6、超滤工艺条件，对蛋清料液进行溶菌酶超滤提取，浓度0．20mol／L的磷酸氢二钠一磷酸二氢钠缓冲液测定其溶菌酶酶活力得率、溶菌酶透过率和蛋白质进行稀释，搅拌均匀，即为超滤料液，溶菌酶酶活清除率。I32l农产品加工Te1：0351-4606086应用推广E-mml：nc~g@163．c0mYin~yongTuiguang固(4)除盐浓缩上述超滤得到的溶菌酶提取液中含有大量磷酸盐，且溶菌酶浓度较低，不利于工业化生产。采用截留分子量为6000Da的中空纤维超滤膜对以上料液进行超滤，可以起到浓缩、除盐的作

7、用。操作条件为室温25oC、0．04MPa，超滤结束时，取一定体积的去离子水为原液进行超滤，以冲洗膜表面，洗脱残留在膜表面的溶菌酶，以减少溶菌酶的损失。4．溶菌酶的亲和层析纯化采用最佳超滤提取工艺获得的蛋清溶菌酶提取液中除含有大量溶菌酶外，还含其他蛋白质、多糖等有机化合物，需要进一步纯化以提高其纯度。溶菌酶在特定条件下兼具甲壳质酶的功能。因此，选用亲和凝胶为经过化学修饰的壳聚糖——脱氨的N一脂肪酰化壳聚糖凝胶，与甲壳质相比，对其他蛋白质、色素、多糖等其他分子的结合吸附能力降低，对溶菌酶具有更好的

8、亲和特异性，分离纯化溶菌酶的效果明显提高。根据装柱凝胶质量和样品液酶活，计算上样量，以O．30mL／min流速加人4700U／mL溶菌酶样品液中。然后，以pH值为l0、质量分数为1．0％的NaHCO，溶液作为平衡液，按0．5mL／min流速对凝胶柱洗涤一段时间后，取质虽-撇为1D％的乙酸溶液，以025mL／min的洗脱流速对凝胶柱进行洗脱。在整个纯化过程中，洗脱液每8mL收集为1管，收集到的洗脱液立即经281nm检验溶菌酶含量。洗脱下来的溶菌酶经冷冻干燥即可得溶菌酶成品。对从浓厚蛋白到最终蛋清溶