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《副结核分枝杆菌map0862基因的克隆及其在大肠杆菌中的表.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、10中国兽药杂志2010,44(8):10~12,21/牟巍,等副结核分枝杆菌map0862基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达1,231111牟巍,蒋菲,何宇,丁家波,彭小兵,蒋玉文(1.中国兽医药品监察所,北京100081;2.福州大北农动物医学研究中心,北京100097;3.中国农业大学动物医学院,北京100193)[收稿日期]2010-06-03[文献标识码]A[文章编号]1002-1280(2010)08-0010-04[中图分类号]S852.61[摘要]为探索MAP0862蛋白在分枝杆菌感染鉴
2、别诊断中的作用,研究构建了MAP0862的原核表达map0862-pET32a(+)质粒,并对其进行了诱导表达。以副结核分枝杆菌P10基因组DNA为模板,经PCR方法扩增副结核分枝杆菌map0862基因片段,将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中。将重组子转化到大肠杆菌BL21(DE3),在E.coli中诱导表达带组氨酸标签的map0862-pET32a(+)的融合蛋白。结果显示,经IPTG诱导表达出约55kD的融合蛋白,用副结核阳性血清进行Westernblot检测,证明MAP0862重组蛋白具有良好的免疫原性。[关键词]副结
3、核分枝杆菌;map0862基因;克隆;表达CloningandExpressionofMycobacteriumaviumsubsp.ParatuberculosisGenemap0862inE.coli1,231111MUWei,JIANGFei,HEYu,DINGJia-bo,PENGXiao-bing,JIANGYu-wen(1.ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl,Beijing100081;2.VeterinaryMedicineResearchCenterofFuzhouDaBeiNo
4、ng,Beijing100097;3.CollegeofVeterinaryMedicine,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100193;China)Abstract:InordertodeterminethefunctionoftheMAP0862inthepreventionanddiagnosisofJohnesdiseaseincattle,thevectormap0862-pET32a(+)wasconstructed.Thegenemap0862wasamplifiedfromM.
5、aviumsubsp.paratuberculosisstrainP10byusingPCRtechnique.PCRproductwasclonedintopET32a(+)plasmid,thentherecombinantplasmidwastransformedintoE.coliBL21(DE3)andexpressed.Resultsshowedthattherecombinantproteinabout55kDwasexpressedandcouldberecognizedbyserumofM.aviumsubsp.pa
6、ratuberculosisinfectedcattleinwesternblo.tThewesternblotanalysisshowedtheexpressedproteinhadantigenicactivity.Keywords:Mycobacteriumaviumsubsp.Paratuberculosis;map0862gene;cloning;expression[2]副结核病是由禽结核分枝杆菌副结核亚种杆计克隆氏病每年造成美国2.5亿美元的损失。菌引起的一种慢性传染病,Johne和Hothinghow于我国从195
7、5年在内蒙古自治区的呼盟谢尔塔拉牧1985年首先发现此病,又名克隆氏病(Johnes场首次发现一例副结核病牛后,1958年长春市奶牛[1]病)。该病主要感染反刍动物,以消化道炎症为场又出现副结核病牛,随后辽宁、黑龙江、陕西、河特征,导致食欲减退、营养吸收不良、消瘦,最后以北等地相继发生本病,几乎遍及东北、西北、华北、[3]肠紊乱或易感染其他病症而导致动物死亡。据统内蒙等地区。随着奶牛业蓬勃的发展,我国的牛作者简介:牟巍(1982年-),女,硕士,从事生物制品研发工作。通讯作者:蒋玉文。jiangyuwen@ivdc.gov.cn2
8、010,44(8):10~12,21/牟巍,等中国兽药杂志11副结核疫情也得到日益广泛而密切的关注。分子量蛋白Maker进行SDS-PAGE电泳,后用考由于与禽分枝杆菌复合群内普遍存在的基因马斯亮蓝染色。和
