利用ssr分子标记建立辣椒纯度鉴定体系

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1、◆试验研究◆2010年第1期辣椒杂志(季刊)利用SSR分子标记建立辣椒纯度鉴定体系白占兵，李雪峰，戴雄泽，(1湖南省蔬菜研究所湖南长沙4101252湖南省蔬菜工程技术研究中心湖南长沙410125)摘要从150对辣椒SSR引物中筛选出116对多态性较好的引物，对兴蔬种业的12个推广辣椒品种的父本、母本及其F代共36份材料进行PCR差异性筛选，其中6对引物能够区分每个品种的父本、母本及其F代；同时对辣椒大群体DNA的快速提取、PCR扩增以及制胶电泳等进行了优化，初步建立了基于SSR分子标记技术的辣椒种子纯度鉴定体系。为辣椒种子纯

2、度鉴定工作者提供了参考，也为辣椒种子指纹图谱的建立奠定了基础。关键词辣椒；SSR；纯度辣椒(CapsicumaHnuumL．)是我国重要的蔬菜，水稻杂交种的纯度体系，并注册国家专利，产生也是重要的调味品，目前我国辣椒年种植面积了巨大的经济效益。130160万hm，总产值270300亿元，需要杂交我国辣椒每年采用传统种子纯度鉴定方法需要种9751200t。随着育种进程的加快，辣椒品种急土地554．8～655．2hm2，费用2500～2900万元，如果剧增多，优质杂交种的种类和需求量的日益增加，利用SSR分子标记技术只需2226

3、万元即可完成使辣椒杂交种质量鉴定研究工作显得极其重要。传纯度鉴定。因此，辣椒种子纯度鉴定SSR技术体系统鉴定一般采用田间鉴定法，其依赖于品种表型差的建立不但为种子企业节约了种子纯度鉴定成本、异，而大多数形态性状易受环境影响，地点、年度间为市场提供了优质的种子，还缓减我国人多地少的也会表现出一定程度的差异，严重的影响了品种纯矛盾，对我国辣椒杂交种种业的可持续性发展具有度鉴定的准确性，真实性。重要意义。随着分子生物学技术的飞速发展，分子标记技本研究旨在利用SSR在辣椒基因组中分布比术已成为作物品种真实性和纯度鉴定的发展方向。较均

4、一，提供的遗传信息多，且具有重复性好，稳定目前，SSR分子标记技术在鉴定种子纯度方面已得性高，成本较低廉和易于操作等优点，建立辣椒杂交到广泛应用。其技术原理是从农作物中分离出位点种纯度快速鉴定SSR分子标记技术体系，为辣椒种特异微卫星SSR，然后利用两端的独特序列设计一子纯度鉴定工作者提供参考，同时为辣椒种子指对引物，利用PCR扩增微卫星的长度多态性片段，纹图谱的建立奠定基础。以达到种子纯度鉴定的目的。石海波等『11报道用SSR标记可以鉴别小麦种子的纯度。姚凤霞等嘲报道用1材料与方法SSR分子标记可以鉴定掖单l3号种子纯度。

5、利用分1．1材料子标记鉴定水稻杂交种的纯度在日本已推广；目材料全部来自于湖南兴蔬种业有限公司，分别前，湖南农业科学院已经完善建立了SSR分子鉴定为：博辣娇红、博辣红玉、博辣红牛、博辣红秀、兴蔬收稿日期：2010—02—08基金项目：湖南省科技公共平台建设专项“春夏蔬菜产业提升关键技术研究”(项目编号K0802172—61)作者简介：白占兵(1977一)，男，主要从事分子标记辅助育种32辣椒杂志(季刊)2010年第1期◆试验研究◆201、兴蔬301、兴蔬201、兴蔬绿燕、福湘秀丽、福湘1．2．4PCR产物的检测扩增完成后在8％

6、聚丙烯碧秀、福湘佳玉、福湘探春及其它们的父母本，酰胺凝胶上电泳(160V，140min)，电泳完成后观察共计36份。记录并照相。1．2方法1．2．1辣椒总DNA的提取纯度鉴定由于样本较2结果与分析大，如何快速低成本提取大批量的DNA成为本实2．1引物筛选与鉴定验的重点和难点，本文采用简化CTAB法提取辣椒从150对辣椒SSR引物中初步筛选出116对的总DNA，且只需倒换试管一次，便可以获得高纯多态性较好的引物，对36份样进行PCR扩增。结果度、高产量的DNA。表明，除个别引物对个别材料没有扩增出条带，大1．2．2PCR反应体

7、系10×Buffer(含Mg2+)1．5l，多数能扩增出清晰的谱带，且重复性较好。为了使10mmol／LdNTP0．1875~1，10I,zmol／L引物0．6l，每个品种至少有一对引物能鉴定出其个体遗传多模板DNA10ng，TaqDNApolymerase0．6U，其余用态性，通过PCR反复筛选，共获得6对能够鉴定出ddH2O补充至l5l。每个辣椒品种父本、母本及F。的多态性引物(F，谱1．2．3PCR扩增条件94~(2预变性3min，94％变性带是其父母本谱带的互补带)(图1)，第4号引物鉴30S，55oC退火30S，7

8、2~C延伸60s，35个循环，72~C定福湘2号的结果见图2。延伸10min。2．2分析福湘探春博辣红秀福湘秀丽福湘佳玉博辣红玉兴蔬绿燕早6F早6F。早6F早6F16F16F37号引物116号引物33号引物图1不同引物鉴定不辣椒品种结果图24号引物对福湘2号鉴定结果从图1和图2可以清楚地看