不同激素及培养基对紫花苜蓿下胚轴愈伤组织诱导及植株再生的影响.pdf

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1、陕西农业科学2015，61(03)：52—54ShaanxiJoumalofAgriculturalSciences不同激素及培养基对紫花苜蓿下胚轴愈伤组织诱导及植株再生的影响李莺，马兰，韩艳玲，罗雯，潘朝锋(1．西安文理学院生物技术学院，陕西西安710065；2．西安市航天中学，陕西西安710065)摘要：以紫花苜蓿无菌苗下胚轴，在附加不同激素配比的改良MS和改良的SH培养基上诱导出愈伤组织并获得再生植株，建立了紫花苜蓿下胚轴离体快速繁殖体系。实验结果表明：适宜下胚轴愈伤组织诱导的培养基为改良的

2、MS+KT0．5mg·LI1+NAA1mg·L-。，出愈率高达100％；适宜愈伤组织再分化的培养基为改良的Ms+KT1mg·L+NAA0．5mg·L～，出苗率40．3％；适宜生根的培养基为1／2MS，生根率达63．4％。关键词：紫花苜蓿；愈伤组织；植株再生；植物激素紫花苜蓿(MedicagosativaL)属于豆科多年一步利用紫花苜蓿构建植物口服疫苗，以及紫花生草本植物，其以高植物蛋白含量、多矿物微量元苜蓿的遗传改良圾基因转化奠定一定基础。素和全维生素种类等优良特性，确立了其作为优1材料与方法质牧

3、草独一无二的地位，在当今世界范围广泛种植。1972年，Saunders和Bingham⋯从未分化成1．1试验材料熟的苜蓿花药、子房、子叶愈伤组织分化出再生植种子公司小包紫花苜蓿种子。株，这标志着苜蓿组织培养研究的开始，1980年，1．2试验方法Kao等报道由苜蓿叶肉原生质体培养，通过胚1．2．1培养基的配制及培养条件以改良的MS状体再生植株获得成功；1981年，杨燮荣等¨3』在和改良的SH培养基附加蔗糖30g·L一，琼脂粉国内首次利用紫花苜蓿(M．sativa)叶片、叶柄、茎5g·L～，pH：5．

4、8～6．0，并设置不同浓度梯度段为外植体成功诱导出了愈伤组织，并获得了再的激素配比，愈伤组织诱导培养基：①改良的MS生植株，1994年白静仁等用黄花苜蓿(M．falca．+KT0．1mg·L+NAA1．0mg·L～；②改ta)叶肉原生质体培养和再生植株成功，在随后的良的MS+KT0．5mg·L+NAA1．0mg·十几年里，研究成果不断出现。L～；③改良的sH+KT0．1mg·L十NAA植物表达系统以经济易行的方式提供了极具1．0mg·L一；④改良的sH+KT0．5mg·L吸引力的疫苗抗原生产方法。

5、利用植物表达外源+NAA1．0mg·L～；分化培养基：⑤改良的MS基因，具有高表达量、低成本、外源基因片段可以+KT0．5mg·L+NAA0．5mg·L～；⑥改整合进染色体中稳定遗传、转基因植株可以简单良的MS+KT1．0mg·L+NAA0．5mg·地通过种子形式长期保存等优点，而且植物细胞L～。生根培养基：⑦1／2MS在PQX一330A一22H能对表达的外源蛋白进行翻译后加工，使表达产多段人工气候培养箱中培养，培养条件：光周期物具有天然活性。到目前为止，研究人员已经在12h·d～，光照强度为40

6、～50txmol·nl～·不同植物中表达了45种以上的抗原。苜蓿为多s)，光照培养温度为25-4-1℃，暗培养温度为18年生可食用农作物，次级代谢物较少；可与固氮菌±1℃培养，湿度60％。共生，因此可减少氮肥的使用；蛋白质萃取和纯化1．2．2无菌苗的培养将紫花苜蓿种子包于纱的步骤已十分成熟，且实验操作方便，是构建植物布中自来水流水冲洗30min，于超净工作台上用口服疫苗的好材料。70％酒精消毒30S，无菌水冲洗1次，再用0．1％笔者研究利用组织培养的基本技术手段，尝升汞表面消毒10min，无菌水冲

7、洗5次。接种于试建立紫花苜蓿的离体快速繁殖再生体系，为进不添加任何激素的MS培养基中于PQX一330A一收稿日期：2014-08-01修回日期：2014-09．10基金项目：西安市科技局发展引导计划资助，No．NC1118(3)。第一作者简介：李莺(1964一)，女，副教授，主要从事植物学及植物生物技术方面的研究。通信作者：罗雯(1974-)，女，教授，博士，从事分子病毒与分子免疫学研究。-52·陕西农业科学2015年第61卷第3期并没有芽的分化。20d统计结果见表2。培养基及添加不同浓度的KT与

8、NAA配比，即诱表2激素对愈伤组织分化的影响导出愈伤组织同时有效遏制了褐化现象的发生。培养基编号激素配比／(mg·L-1)出苗率／％说明不同的培养基种类由于所配成分的不同。对①改良MS+KT0．1+NAAi．00紫花苜蓿下胚轴愈伤组织的诱导影响不大但影响②改良MS+KT0．5+NAA1．00诱导出的愈伤组织的褐化。③改良MS+KT0．5+NAA0．510．8实验结果表明：适宜紫花苜蓿下胚轴愈伤组④改良MS+KT1．0+NAA0．540．3织诱导培养基为改良的MS+KT0．5mg·L