选修3-12基因工程的基本操作程序.ppt

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1、1.2基因工程的基本操作程序目的基因的获取1基因表达载体的构建23将目的基因导入受体细胞4目的基因的检测与鉴定步骤一、目的基因的获取12概念？方法？探究1互动课堂1、目的基因主要是编码蛋白质的基因：如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因2、也可以是具有调控作用的因子方法1、从基因文库中获取目的基因123含义？种类？依据？探究2互动课堂提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接导入受体菌中储存基因组文库基因组文库的构建cDNA文库的构建提取某种生物的某器官或特定发育时期的

2、mRNA单链DNA双链cDNA片段重组载体与载体连接cDNA文库反（逆）转录酶DNA聚合酶导入受体菌中储存问题1为什么用生物发育某个时期的mRNA反转录得的DNA只有这种生物的部分基因？某个时期的发育是基因选择性表达的结果怎样从基因文库中获取我们所需的目的基因呢?（获取依据）根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA、基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。问题2原核细胞的基因结构(补充内容）非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子①不编码蛋白质。：编码蛋白质,连续不间断编码区非编码区原核细胞的基因结构②调控遗传信

3、息表达,上游有启动子，下游有终止子真核细胞的基因结构（补充内容）编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子启动子终止子编码区上游编码区下游真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用,上游有启动子，下游有终止子非编码序列：包括非编码区和内含子方法2、利用PCR技术扩增目的基因123前提？原理？过程？探究3互动课堂4条件？方法2、利用PCR技术扩增目的基因PCR扩增仪(一)、PCR技术扩增过程1.高温变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，断裂，形成_______2.低温退火（55℃-60℃）：与模板结合,形成局

4、部双链。3.适温延伸（70℃-75℃）：合成链在作用下延伸，合成互补的DNA。Taq酶DNA引物单链DNA氢键方法2、利用PCR技术扩增目的基因PCR之歌PCR之歌TherewasatimewhentoamplifyDNA,Youhadtogrowtonsandtonsoftinycells.ThenalongcameaguynamedDr.KaryMullis,Saidyoucanamplifyinvitrojustaswell.Justmixyourtemplatewithabufferandsomeprimers,Nucleotidesandpolymerases,too.Den

5、aturing,annealing,andextending.Wellit’samazingwhatheatingandcoolingandheatingwilldo.PCR,whenyouneedtodetectmutations.PCR,whenyouneedtorecombine.PCR,whenyouneedtofindoutwhothedaddyis.PCR,whenyouneedtosolveacrime.从前你要扩增DNA，总有培养大批细胞的重任要你背。这时有个家伙叫KaryMullis博士的，他钻出来说体外合成也一样OK！只要把你的模板混上缓冲液，再加些引物，还

6、有核苷和聚合酶。变性，退火，和延伸。加热~冷却~加热~太神奇了！当你想要检测突变，来啊做PCR吧！当你想要基因重组，来啊做PCR吧！  当你想知道孩子他爹到底是谁，来啊做PCR吧!当你想要侦破大案，来啊做PCR（二）操作前提：一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物引物（一小段单链DNA）（三）原理：（四）条件DNA的复制DNA聚合酶（耐高温）温度控制原料(脱氧核苷酸)模板（五）扩增形式：指数形式（2n）（目的基因）方法3：通过DNA合成仪直接合成目的基因DNA合成仪推测推测合成前提：基因比较小、核苷酸序列已知蛋白质的氨基酸顺序mRNA核苷酸序列基因DNA的核苷酸序列目的基因步骤二

7、：基因表达载体的构建12目的？组成？探究4互动课堂步骤二：基因表达载体的构建——基因工程的核心1目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。2组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因等表达载体的组成启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，RNA聚合酶识别和结合的部位终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录标记基因：鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将