实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化.ppt

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1、实验五细菌生理生化反应、免疫标本的观察微生物学与细胞生物学教研室实验目的掌握细菌生理生化反应原理与方法熟悉细菌的荚膜、芽孢、鞭毛等特殊结构了解淋巴细胞转化、E-玫瑰花环试验原理实验原理1.糖发酵试验不同微生物发酵单糖的能力各异，产生的分解产物也不同，可以作为细菌分类鉴定的手段。大肠埃希菌/产气肠杆菌葡萄糖CH3COCOOHHCOOH甲酸解氢酶H2+CO2伤寒沙门菌葡萄糖CH3COCOOHHCOOH指示剂：溴麝香草酚蓝pH<6.3(黄)；6.37.2(蓝)pH6.3pH7.2不同微生物所

2、含酶系统不同，某些细菌含有色氨酸酶，能够分解培养基内蛋白胨中的色氨酸。大肠埃希菌色氨酸产气肠杆菌色氨酸酶+H2OCH3COCOOH吲哚+检测：吲哚+对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚+H2O玫瑰红色吲哚试验阳性。实验原理2.吲哚试验（I）吲哚阴性。检测不同细菌分解葡萄糖产酸的能力。大肠埃希菌葡萄糖产气肠杆菌指示剂：甲酸乙酸乳酸琥珀酸等分解甲酸、乙醇和乙酰甲基乙醇葡萄糖分解甲基红pH<4.5(红)；pH>5.4(橘黄色)。实验原理3.甲基红试验（M）pH4.5pH5.4某些细菌在糖代谢过程中，经糖酵解途径产生丙酮酸。因不同细

3、菌所含酶不同，进一步对丙酮酸的代谢也不同。大肠埃希菌产气肠杆菌2CH3COCOOHCH3COCHOHCH3+2CO2O2+KOHCH3COCHOHCH3CH3COCOCH3CH3COCOCH3+胍基红色化合物+H2OVP试验阴性。实验原理4.VP试验（V）肠杆菌科各种细菌利用柠檬酸盐的能力不同，有的菌可利用柠檬酸钠作为碳源，有的则不能。大肠埃希菌产气肠杆菌大肠埃希菌不能利用柠檬酸盐，故不能在以柠檬酸盐为唯一碳源的培养基上生长。柠檬酸盐利用试验阴性。产气肠杆菌能在以柠檬酸盐为唯一碳源的培养基上生长，并分解柠檬酸盐产生

4、CO2，再生成碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，培养基中的指示剂BTB由绿色变为蓝色。实验原理5.枸橼酸盐利用试验（C）实验材料培养基：生化培养基菌种：大肠埃细菌、产气肠杆菌试剂：柯氏试剂、甲基红、40%KOH、α-6%萘酚①单糖发酵试验直接观察②吲哚试验加入5滴柯氏试剂，振荡，静置后观察③甲基红试验加入5滴甲基红，振荡，静置后观察④伏普试验加入0.4mL40%KOH,开盖振荡，再加入α-6%萘酚⑤柠檬酸盐利用试验直接观察1.细菌生理生化反应结果观察：实验步骤2.细菌特殊结构观察：实验步骤①芽孢破伤风梭菌2.细菌特殊

5、结构观察：实验步骤②荚膜肺炎链球菌2.细菌特殊结构观察：实验步骤③鞭毛变形杆菌3.免疫标本观察：实验步骤①淋巴细胞转化观察已转化3.免疫标本观察：实验步骤②E-玫瑰花环原始记录列表描述细菌生理生化反应现象实验结果1.细菌生理生化反应结果+IMVC大肠埃希菌产气肠杆菌++++---菌名+-糖发酵实验结果2.细菌特殊结构绘图3.免疫标本绘图注意事项1.VP实验一定要注意开盖振荡！且反应时间较长。