酶联免疫吸附试验检测人叶酸受体抗体IgM方法的建立及评价-论文.pdf

《酶联免疫吸附试验检测人叶酸受体抗体IgM方法的建立及评价-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中国医学科学院学报ACTAACADEMIAEMEDICINAESINICAE·论著·酶联免疫吸附试验检测人叶酸受体抗体IgM方法的建立及评价杨娜，王琳琳，袁悦，叶荣伟，任爱国北京大学生育健康研究所卫生部生育健康重点实验室北京大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系，北京100191通信作者：王琳琳电话：010—82802976，传真：010-82801141，电子邮件：linlinwang@bjmu．edu．cn摘要：目的建立酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人血浆叶酸受体抗体IgM的方法。方法将从正常分娩健康产妇的胎盘中提取、纯

2、化人叶酸受体蛋白稀释至5ng／l，作为抗原包被96孔板，以羊抗人IgM作为二抗，以健康人混合血浆作为标准品，浓度设定为1。采用ELISA检测人血浆叶酸受体抗体IgM水平，并评价该方法的灵敏度、精密度和稳定性。分别以人叶酸受体蛋白和牛源叶酸结合蛋白作为包被蛋白，检测24例健康新生儿母亲和20例神经管畸形患儿母亲的血浆标本叶酸受体抗体IgM水平，比较两种包被蛋白的检测结果。结果ELISA方法可以检测的人血浆叶酸受体抗体IgM浓度为6．25×10～～8．00X10_，最低检测限为3．12×10～。该方法检测高、中和低浓度血浆叶酸受体

3、自身抗体IgM的批内差异分别为6．61％、3．50％和5．12％，批问差异分别为4．54％、5．49％和5，44％，此方法检测不同稀释倍数样品中叶酸受体自身抗体IgM浓度的测定值均在均数±10％范围内。人叶酸受体包被检测板测得的健康新生儿母亲(t=一11．9，P<0．001)及神经管畸形患儿母亲(t=7．35，P<0．001)的叶酸受体抗体lgM浓度均显著高于牛源叶酸结合蛋白包被检测板的测定值。结论本研究成功建立了检测人血浆叶酸受体抗体IgM的ELISA方法，该方法以人叶酸受体蛋白作为包被蛋白，检测灵敏度高，精密度好，结果稳定

4、。关键词：叶酸受体；叶酸受体自身抗体；酶联免疫吸附试验；IgM中图分类号：R17文献标志码：A文章编号：1000—503X(2014)04—0410—05DOI：10．3881／j．issn．1000—503X．2014．04．O11EstablishmentandEvaluationofEnzyme-linkedImmunosorbentAssayforMeasuringHumanIgMAutoantibodytoFolateReceptorYANGNa，WANGLin—lin，YUANYue，YERong—wei，RENA

5、i'guoPekingUniversityInstituteofReproductiveandChildHealth，theKeyLaboratoryonReproductiveHealthofMinistryofHealth，DepartmentofEpidemiologyandHealthStatistics，SchoolofPublicHealth，PekingUniversity，Beijing100191，ChinaCorrespondingauthor：WANGLin·linTel：010—82802976．Fax

6、：010—82801141，E·mail：linlinwang@bjmu．~du．cnABSTRACT：ObjectiveToestablishthemethodofenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)formeasuringhumanIgMautoantibodytofolatereceptor．MethodsFolatereceptorwasextractedandpurifiedfromthehealthywomanplacenta．Theproteinwascoatedon96一

7、wellplateswithaconcentrationof5as／tx1．GoatmoB—oclonalantibodywasusedfordetectingantibody．PooledplasmafromhealthydonorswasusedtoplotthestandardcurveandtheIgMconcentrationofpooledplasmawasdefinedas1．WesetupanELISAproceduretomeasurehumanIgMautoantibodytofolatereceptor．

8、Thesensitivity，precision，andstabilityofthemethodwereevalua-ted．Fu~her，thefolatereceptorandbovinefolate—bindingproteinwereusedastheantigen，