实时浊度LAMP法检测豆制品中转基因成分-论文.pdf

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1、FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES实时浊度LAMP法检测豆制品中转基因成分叶蕾，沈会平，闰鹤，李琳，石磊(华南理工大学轻工与食品学院，广东广州，510641)摘要通过设计转基因大豆内源基因(Lectin)、外源基因NOS和2个转基因大豆品系(GTS40—3-2。MON89788)特异性LAMP引物，建立快速检测转基因大豆以及鉴定转基因大豆品系的LAMP体系，并选取国内豆制品利用CTAB法进行DNA提取，并针对上述基因进行PCR和LAMP扩增的对比，建立起了检测大豆制品中转基因成分的定性的LAMP方法。结果表明

2、：4个LAMP方法均有较好的特异性，除了NOS、GTS40—3—2的检测限为0．1％外，其他LAMP方法的灵敏度为0．O1％，均能满足实际检测要求；在实时浊度LAMP法检测大豆制品转基因成分的鉴定中，传统的CTAB法能成功提取大豆粗加工制品的DNA，且DNA纯度能够进行核酸扩增反应。利用转基因外引物进行的普通PCR结果与实时浊度LAMP结果是一致的，说明建立的转基因实时浊度LAMP检测方法有很好的准确性。关键词LAMP，豆制品，转基因由于转基因食品存在着对人类健康和安全以及察等过程，而且LAMP反应所用设备简单、花费少，又对环境的潜

3、在危害，如转基因植物中毒性物质以及残能满足快速检测的需要，特别适用于在一些基层机构留量的微量累积性、过敏症、转基因作物的本身耐药推广应用，有着广泛的应用前景。。为了研究与人性、病原体抗药性、抗性基因的基因漂移、生物多样性们生活密切相关的大豆制品中是否含有转基因成分，的破坏等。因此转基因食品一进人流通领域，其选取了豆腐、豆腐干、豆奶粉、大豆油、腐乳、酱油等豆安全性问题受到广泛关注，对其在流通领域的安全性制品进行DNA提取，并设计相应引物进行LAMP扩评估和控制则显得尤为重要。尽快建立和完善转基增，建立起了检测大豆制品中转基因成分的定性

4、因生物和产品的检测方法，对保证环境和消费者安LAMP方法。全，对设置我国的绿色技术壁垒，打破国外技术壁垒，目前，LAMP已逐步应用于转基因食品分析中。促进我国农产品的出口具有十分重要的意义。Lee等。。针对MS8、RF3转化体特异性序列及CaMV环介导等温扩增技术(1oop—mediatedisothermal35S启动子、NOS终止子等位点建立了转基因油菜的amplification，LAMP)是2000年由日本的荣研株式会LAMP快速检测方法，检测限达到0．叭％。2010年，的Notomi等人提出的新的核酸扩增技术。它依赖Gua

5、n等用可视LAMP直接检测2个转基因大豆品于4条特异性引物和一种具有链置换活性的DNA聚系GTS40—3—2和MON89788，能够实现对该转基因大合酶(BstDNA聚合酶)在等温条件下可高效、快速、豆的特异性检测。2011年Chen等成功建立了特特异性地扩增靶序列。在反应过程中，DNA不断地异性检测7种转基因玉米品系的LAMP法，用凝胶电延伸合成，从脱氧核酸三磷酸基质(dNTPs)中析出的泳和添加SYBIGreen2种方法来观察结果，并用建立焦磷酸根离子与反应溶液中的镁离子结合，产生一种的方法对实际样品的中转基因玉米成分做检测。我

6、焦磷酸镁的衍生物，而高效扩增的LAMP法生成大量国近年来，也有许多将LAMP方法用于转基因检测的此衍生物，并呈现白色沉淀。将浑浊度作为鉴定报道。杜正平建立了LAMP法检测转基因大豆和指标，只要用肉眼观察白色混浊沉淀，就能鉴定扩增水稻，并与Q．PCR对比，进行特异性和灵敏度实验，与否，而不需要模板的热变性，繁琐的电泳和紫外观筛选得到2个内源基因、4个外源基因检测的环介导等温扩增法引物。柳毅针对转基因大豆的特异基第一作者：博士研究生(石磊为通讯作者)。因CP4一EPSPS设计引物，建立了LAMP法检测转基广州市科技计划项目(No．11C

7、12080718)；厦门市重大科技计划项目(No．3502Z20110001)；中央高校基本科研业务费专项资因大豆方法。兰青阔等建立了针对转基因大豆金资助(No．2012ZZ0083)cp4一epsps基因的LAMP检测方法，在65℃保温30收稿日期：2012—06—20，改回日期：2012—07—22rain，通过荧光显色即可完成对转基因的检测工作。2012Vo1．38No．8(Total296)结果显示，该LAMP方法能够特异性检测ep4一epsps13科技有限公司；凝胶成像系统GelDocEQ，美国基因，其检测灵敏度是常规定性

8、PCR方法的10倍。BIO．RAD公司。本研究针对大豆内源基因Lectin、NOS终止子以1．3实验方法及转基因大豆GTS40—3-2和MON89788的靶基因，1．3．1DNA提取筛选得到对4套环介导等温扩增引物，建立转基因成本研究