液体发酵法发酵豆粕产蛋白酶条件的优化-论文.pdf

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1、江苏农业科学2014年第42卷第8期·-——273·-——王伟，王世莫，朱宝成．液体发酵法发酵豆粕产蛋白酶条件的优化[J]．江苏农业科学，2014，42(8)：273—275液体发酵法发酵豆粕产蛋白酶条件的优化王伟，王世英，朱宝成(河北农业大学生命科学学院，河北保定071001)摘要：为了提高B—l5菌株发酵豆粕产蛋白酶能力，采用单因素法对B—l5菌株发酵培养基所需的碳源、氮源、无机盐进行筛选，采用正交试验对B—l5菌株的发酵培养基组成及发酵培养条件进行优化，最终确定最适发酵培养基组成为葡萄糖为2％、豆粕浓度为12％、KC1为

2、0．01％、Mgs04为0．05％。通过发酵工艺条件参数的正交优化试验得出发酵培养基的最佳工艺参数为：发酵时间为48h，装瓶量为50mL，种龄为14h，pH值为6．5。在此条件下B—l5菌株发酵产蛋白酶活力为125．05U／mL，与基础发酵培养基相比，提高了11．9％。关键词：液体发酵；发酵条件；正交优化；蛋白酶活力中图分类号：TQ920．1文献标志码：A文章编号：1002—13o2(2014)08—0273—03大豆肽是一种比大豆蛋白质更为优质、新型的大豆蛋白1．2试验方法酶改性产品，广泛应用于发酵、制药、食品、化妆品、饲料

3、及植1．2．1菌种的培养与发酵物营养剂等行业“。大豆肽易消化吸收，能迅速供给机体1．2．1．1摇瓶种子曲线(生长曲线)及种子培养将斜面培能量，无蛋白变性，无豆腥味，液体黏性小和受热不凝固等，并养的菌株接种于NB培养基中，250mL三角瓶中的装瓶量为具有降低血清胆固醇．、降低血压、抗疲劳、抗氧化等许75mL(250mL，下同)，在37℃下180r／min振荡培养，在零多生物功能，因此大豆肽成为研究热点。目前，大豆肽多采用时开始取样，以后每隔1h或2h取样1次，直至培养24h为酶解法和微生物发酵法生产，微生物发酵法把蛋白酶的发止，

4、以未接菌的培养基作空白调零，用分光光度计在600llm酵生产和大豆肽的酶解生产有机结合在一起，降低了大豆肽下测D，以发酵时间为轴、以D为，，轴作曲线，绘制生长曲功能的生产成本，克服了酶水解法制备大豆肽产品的苦味大线。将斜面培养的菌株接种于NB培养基中，装瓶量为和口感差等缺点J。目前，利用微生物发酵法生产大豆肽被75mL，180r／min摇床培养，培养时间由生长曲线确定，得到认为是较先进有效方法，应用前景较好。本试验以蛋白酶活种子液。力为指标，通过单因素和正交试验对产蛋白酶芽孢杆菌1．2．1．2发酵培养对培养基成分采用以下的培养

5、条件进B一15发酵处理豆粕的产酶培养基组成、发酵工艺条件进行行优化：将种子液以2％的接种量接入75mL／250mL三角瓶了优化，以确定最佳的豆粕发酵产酶工艺，为大豆肽的大规模发酵培养基中，于37℃、180r／min下振荡培养48h，将发酵液态发酵生产奠定坚实基础。液在5000r／min条件下离心10min，弃去沉淀，收集上清液，进行蛋白酶活力测定。1材料与方法1．2．2单因素试验1．1材料1．2．2．1不同碳源分别以2％的蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露1．1．1供试菌株细菌菌株：解淀粉芽孢杆菌(BaciUu~醇、可溶性淀粉、玉米淀粉

6、、D一果糖等7种碳源进行B一15amyloliquefaciens)B一15，由河北农业大学生命科学学院制药菌株产酶活力比较试验，配制7种碳源不同的发酵培养基，均工程实验室分离并保存。加入10％氮源豆粕，0．84％Na2HPO，0．032％KH2PO，1．1．2培养基NA培养基、NB培养基的配制详见文献0．17％CaCI2，混匀后调pH值6．0～6．5，筛选出最适碳源。[9]。种子培养基即NB培养基；基础发酵培养基：豆粕I．2．2．2不同氮源浓度配制豆粕浓度分别为2％、5％、10％、Na2HPO40．84％、KH2PO40．0

7、32％、CaC120．17％、混匀8％、II％、14％的培养基发酵培养，进行B—l5菌株产酶活力后调pH值6．0—6．5。比较试验，均加入2％最适碳源，0．84％NaxHPO4、0．032％1，1．3试剂福林一酚试剂；O．55mol／L碳酸钠溶液、10％KH2PO,、0．17％CaC1：，混匀后调pH值6．0—6．5，筛选出最三氯醋酸溶液、0．02mol／LpH值7．5磷酸缓冲液、1％酪蛋白适氮源浓度。溶液、100mL标准酪氨酸溶液，所用试剂皆为分析纯。1．2．2。3不同无机盐以浓度为0。o5％的CaC1：、MgSO、YeSO

8、、MnC12、KC1、NaCI、ZnC12等7种供试无机盐进行B一15菌株产酶活力比较试验，配制7种无机盐不同的发酵培养基，收稿日期：2013—1O一09均加入2％最适碳源，最适氮源浓度的豆粕，0．84％基金项目：河北省科技支撑计划(编号：11225525)。Na2HPO、0