青蒿素增敏复方抑制肿瘤细胞增殖及延缓荷瘤裸鼠移植肿瘤生长的研究

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1、广州中医药大学学报2010年5月第27卷第3期254JournalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicineMay2010，Vo1．27，No．3青蒿素增敏复方抑制肿瘤细胞增殖及延缓荷瘤裸鼠移植肿瘤生长的研究黄玲，张平祖，曾庆平(1．广州中医药大学学报编辑部，广东广州510405；2．广州中医药大学热带医学研究所，广东广州510405)摘要：【目的】提高青蒿素抗肿瘤效率，阐明青蒿素增敏复方的抑瘤增敏机理。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(Mrr)法测定各药物对人肝

2、癌细胞株HepG2细胞的生长抑制率；经皮下接种HepG2细胞进行荷瘤裸鼠造模，测定给药15d后瘤体质量，计算抑瘤率。【结果】青蒿琥酯配伍马来酸二乙酯、巯基琥珀酸和氨基三唑后，肿瘤细胞的生长抑制率较相同浓度的青蒿琥酯单方高43．84％，抑瘤率较青蒿琥酯单方提高近3倍。HepG2细胞中抗氧化剂含量及抗氧化酶活性测定结果表明，空白组的测定值均高于单方组和复方组，而复方组的测定值低于单方组。【结论】青蒿素增敏复方可能通过降低抗氧化剂含量及抑制抗氧化酶活性发挥抗肿瘤增敏作用。关键词：青蒿素／药理学；肿瘤／中西结合疗法；增敏

3、；细胞培养；疾病模型，动物；裸鼠中图分类号：R285．5文献标志码：A文章编号：1007—3213(2010)03—0254—04青蒿素是从中药青蒿(ArtemisiaannuaL．)中品，氨基三唑为上海精纯试剂有限公司产品，5．氟提取的抗疟倍半萜过氧化内酯，其人工半合成衍生尿嘧啶(5一FU)、四甲基偶氮唑盐(M'IT)、二甲物青蒿琥酯、双氢青蒿素、蒿甲醚等已广泛用于疟基亚砜(DMSO)均购自Sigma公司，DMEM培养疾治疗。在青蒿素抗疟研究中发现，阿霉素、维生基(低糖)购自Gibco公司，胰酶、胎牛血清均购素

4、B2和甲萘酯等自由基引发剂(促氧化剂)与青自TBD公司，蛋白质、GSH含量及GSH．PX、CAT蒿素有协同抗疟作用，而生育酚、抗坏血酸、谷胱活性测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所生产甘肽、二硫苏糖醇等自由基清除剂(抗氧化剂)(批号：20090221)。则能降低青蒿素的抗疟作用¨。当疟原虫的过氧化1．2实验动物和肿瘤细胞株SPF级BALB／c—l'lU物酶和过氧化氢酶受到抑制后，青蒿素的疗效则明裸鼠，雌性，4周龄，体质量16～18g，由南方医显提高J。因此，自由基引发剂增加或自由基清除科大学实验动物中心提供，合格

5、证号：SCXK粤剂减少对青蒿素的抗疟活性都有增效作用。2006-0015。人肝癌HepG2细胞株由中山大学提供。为提高青蒿素的抗肿瘤效果，本研究以谷胱甘1．3主要仪器CK40．F200型倒置显微镜肽(GSH)耗竭剂马来酸二乙酯、谷胱甘肽过氧化(Olympus公司)，HWO301T—VBA型CO2培养箱物酶(GSH—PX)抑制剂巯基琥珀酸、过氧化氢酶(Harris公司)，LegendMicro17／17R21／21R型高(CAT)抑制剂氨基三唑等自由基清除剂与青蒿琥速冷冻离心机(赛默飞世尔科技中国有限公司)，酯组成

6、抗肿瘤增敏复方，通过体外及体内实验比较MK3型酶标仪(热电上海仪器有限公司)，BS124S复方与单方抑制人肝癌细胞株HepG2增殖及延缓型电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)，荷瘤小鼠移植肿瘤生长的效果，并初步阐明青蒿琥722型可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公酯增敏复方增强抗肿瘤效果的作用机制，为青蒿素司)。抗肿瘤的I临床应用打下基础。现报道如下。1．4MTT比色测定取对数生长期的HepG2细胞，用2．5g／L胰酶消化为单个细胞，作细胞计1材料与方法数，以培养液稀释为终浓度5×10／mL的单细胞1．1药

7、物和试剂青蒿琥酯由桂林南药股份有限悬液，每孑L100txL接种于96孔板中，置于37~C、公司生产(批号：LA090902)，马来酸二乙酯为东体积分数5％CO培养箱中培养1～2d，待细胞贴京化成工业公司产品，巯基琥珀酸为Alfa公司产壁后，加入100txL终浓度为10～～10mol／L的收稿日期：2010一O1—21作者简介：黄玲(1963一)，女，副研究员基金项目：广东省自然科学基金资助项日(编号第3期黄玲，等．青蒿素增敏复方抑制肿瘤细胞增殖及延缓荷瘤裸鼠移植肿瘤生长的研究255药物于各孔中保温48h后，每孔加

8、入5mg／mL价根据各药物对HepG2细胞的Ic。进行青蒿琥酯MTY溶液20L，置于37℃、体积分数5％CO，培复方配伍，其中青蒿琥酯浓度为5X10‘。molfL，养箱中保温4h，小心吸掉孔中培养液，加入150马来酸二乙酯浓度为0．5×10～mol／L，巯基琥珀txLDMSO，静置10min后，用酶标仪测定490nm酸浓度为1×10～moL／L，氨基三唑浓度为1×处的光吸