DB37T 3421-2018 混合型饲料添加剂中氟喹诺酮类药物的测定 高效液相色谱法.doc

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1、ICS 65.120B46     DB37山东省地方标准DB37/T3421—2018     混合型饲料添加剂中氟喹诺酮类药物的测定高效液相色谱法Determinationoffluoroquinolonesinmixedfeedadditives-Highperformanceliquidchromatography2018-09-14发布2018-10-14实施山东省质量技术监督局   发布DB37/T3421—2018前  言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。本标准由山东省畜

2、牧业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：山东省饲料质量检验所。本标准主要起草人：张芸、孙延军、张玮、宫玲玲、李俊玲。5DB37/T3421—2018混合型饲料添加剂中氟喹诺酮类药物的测定高效液相色谱法1　范围本标准规定了用高效液相色谱仪测定混合型饲料添加剂中氟喹诺酮类药物诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、甲磺酸达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星的方法。本标准适用于〔以饲料原料稻壳粉、玉米皮、葡萄糖、玉米淀粉、以及多种饲料原料混合物（包括稻壳粉、玉米皮、葡萄糖、玉米淀粉、桔梗、甘草、白术、赤药、知母、茯苓等混合）为载体〕的混合型饲料添加

3、剂中氟喹诺酮类药物的测定。诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星和沙拉沙星检出限为0.15mg/kg，定量限为0.5mg/kg；甲磺酸达氟沙星检出限为0.05mg/kg，定量限为0.15mg/kg。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3　原理试样中的氟喹诺酮类药物用盐酸甲醇溶液提取，高效液相色谱-荧光检测法测定，外

4、标法定量。4　试剂或材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯。水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1　甲醇。4.2　乙腈：色谱纯。4.3　乙腈水溶液：乙腈+水=1+9，V+V。4.4　盐酸溶液：c（HCl）=0.1mol/L。取浓盐酸9mL缓慢加入1000mL水中，摇匀。4.5　盐酸甲醇溶液：盐酸溶液（4.4）+甲醇=8+2，V+V。4.6　柠檬酸-乙酸铵缓冲溶液：称取10.56g柠檬酸和7.87g乙酸铵溶解于约800mL水中，用冰乙酸或三乙胺调节pH至4.0，用水定容至1000mL。过0.22μm滤膜，备用。4.7　氢氧化钠溶

5、液：c（NaOH）=30mmol/L。称取0.12g氢氧化钠，用水溶解并定容至100mL。4.8　诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、甲磺酸达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星标准品：纯度及CAS号见附录B。4.9　氟喹诺酮类药物标准储备液（1mg/mL）：准确称取诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、甲磺酸达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星各10mg(准确至0.0001g)于10mL棕色容量瓶中，加30mmol/L氢氧化钠溶液溶解定容。2℃～8℃避光保存，有效期为6个月。5DB37/T3421—20181.1　氟喹诺酮类药物标准工作液Ⅰ（100µg/mL）

6、：准确移取氟喹诺酮类药物标准储备液1mL于10mL棕色容量瓶中，用乙腈稀释定容。2℃～8℃保存，有效期为6个月。1.2　氟喹诺酮类药物标准工作液Ⅱ（10µg/mL）：准确移取氟喹诺酮类药物标准工作液Ⅰ1mL于10mL棕色容量瓶中，用乙腈稀释定容。2℃～8℃保存，有效期为6个月。1.3　氟喹诺酮类药物标准系列溶液：取适量上述标准工作液Ⅱ于10mL棕色容量瓶中，用乙腈水溶液（4.3）配制成标准系列溶液，浓度分别为0.01µg/mL、0.02µg/mL、0.05µg/mL、0.1µg/mL、0.2µg/mL、0.5µg/mL、1µg/m

7、L，5µg/mL。现用现配。2　仪器设备2.1　高效液相色谱仪：配荧光检测器。2.2　电子天平：感量0.001g和0.01mg。2.3　旋涡混合器。2.4　离心机：转速不低于5000r/min。2.5　微孔滤膜：0.22μm，水相。3　样品按GB/T20195制备试样，粉碎过0.45mm试验筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。4　试验步骤4.1　提取准确称取试样2g（精确至0.001g），置于50mL具塞离心管中，准确加入盐酸甲醇溶液(4.5)10mL,涡旋振荡10min。于离心机5000r/min离心10min。取上清液过0.22μ

8、m滤膜，备用。4.2　测定4.2.1　高效液相色谱参考条件a)色谱柱：C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒径2.7µm，或性能相当者；b)流动相：柠檬酸-乙酸铵缓冲溶液（4.6）+乙腈（4.2），梯度洗脱程序见表1；c)流速：0.7mL/mi