阎-实验二-土壤中微生物的分离纯化.ppt

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1、实验二土壤中微生物的分离与纯化实验从土壤中稀释分离微生物一、实验目的：学习微生物稀释平板计数及划线分离技术二、实验原理采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法在固体培养基上形成单个菌落。分离细菌用牛肉膏培养基，分离放线菌用高氏培养基，分离真菌用马丁-孟加拉红培养基。依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数目土壤是微生物的大本营从土壤中稀释分离微生物的方法如下：（一）土壤悬液制备准备1瓶土壤悬液：称10克土壤放入带玻璃珠的9

2、0ml瓶装无菌水中，手摇振荡(10-20min)，使土样分散。三、实验步骤：（二）倒固体琼脂培养基平板：分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（350ml／瓶）熔化后，凉至45-50度倒平板。（三）悬液稀释：方法见下图：（四）悬液涂布(演示):无菌操作(从稀至浓将菌液涂布均匀)采用10－3，10－4，10－5稀释液0.1ml涂布牛肉膏蛋白胨平板（演示）平板涂布简单易行，但易造成机械损伤Liquidspecimenisspreadonthesurfaceofsolidagarwithasterilebentglassrod.五、划线分离每人用剩下的1个平板做划线分离，从三角

3、瓶中取土壤悬液作划线分离平皿划线分离法（五）吹干将已涂布好的平皿皿盖半揭开，置于无菌台上吹干。（六）培养：待吹干后，将平板用报纸包好（每个平板方向一致），写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培养(温度?)。（七）检查结果结果分析:1.计数：牛肉膏平板取单菌落数目在30～300个左右的稀释度来计数，马丁氏平板取单菌落数目在10～100个左右的稀释度来计数2.我所计数的平板稀释度是：单菌落数目：、。3.计算：活菌数目/每克土壤＝（计算过程）＝个/每克土壤4.对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析实验要求做1个土样梯度分离倒12个平皿(其中6个用于稀释涂布，6个用于划线)

4、每组(5-6人)试管斜面接种1.两支试管呈“V”字形2.拔下试管塞3.火焰上微烧一周4.接种环灼烧、冷却5.接种、划线6.塞上塞子，灼烧接种环实验报告从土壤中稀释分离微生物的原理、方法、步骤。2．思考题(1)为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键?为什么?(3)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里?本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！所用器皿自己洗净！请第三组同学留下值日下周再见！